雷公藤红素抑制Ca～(2+)-CaMKⅡ依赖的Akt/mTOR通路干预镉诱导神经细胞凋亡分子机理研究

发布时间：2024-03-10 18:31

　　本研究采用细胞培养、荧光染色、RNA干扰、MTS分析、Western blotting等细胞学和分子生物学技术及方法,综合研究了在镉诱导神经细胞凋亡中,雷公藤红素的保护作用；基于镉激活Akt/mTOR通路探讨了雷公藤红素抗镉诱导的神经细胞凋亡机理；进一步研究了雷公藤红素调控Ca2+和CaMKⅡ在阻滞镉激活Akt/mTOR通路及保护抗镉诱导神经细胞凋亡中作用及其分子机理。结果如下。1雷公藤红素抑制镉诱导神经细胞[Ca2+]i升高干预凋亡性细胞死亡PC12细胞及原代神经元用Celastrold(1μM)预处理1 h后用Cd(10和20μM)处理8 h或24 h。用Fluo-3/AM探针分析[Ca2+]i荧光强度、MTS分析细胞活性、Western blot分析Cleaved-caspase-3和Cleaved-PARP蛋白的表达、DAPI分析细胞凋亡情况。结果表明,Cd能引起细胞[Ca2+]i荧光强度和凋亡的增加及细胞活性降低,同时Cd还能引起Cleaved-caspase-3蛋白和Cleaved-PARP蛋白的表达增加,用Celastrol预处理可以逆转Cd引起的这些变化。提示：雷公藤红...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图５－３雷公藤红素阻滞領诱导神经细胞Ｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｅｐａｓｅ－３和Ｃｌｅａｃｅｄ－ＰＡＲＰ??

ｎＪｉｉ??Ｃｅｌ?巧?ｔｒｏｌ?１｜ｉＭ?－?＋?－?＋?—?＋??Ｃｄ?｜ｉＭ?０?０?１０?１０?２０?２０??图５－２雷公藤红素抑制矯诱导神经细胞调亡??Ｆｉｇ．?５－２?Ｃｅｌａｓｔｒｏｌ?ｉｎｈ化ｉｔｅｄ?Ｃｄ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ｎｅｕｒｏｎａｌ?ｃｅｌｌ?ａｐｏｐ化ｓ....

图６－１雷公藤红素抑制編巧活的Ａｋｔ／ｍＴＯＲ信号通路??Ｆｉｇ－?６－１?Ｃｅｌａｓｔｒｏｌ?ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ?Ｃｄ?ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ?乂ｋｔ／ｍＴＯＲ?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｆｌｉｗａｙ??

提前制备好１２％的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白胶，掛颐序点样，跑２０Ｙ），把蛋白胶上的蛋白转移到ＰＶＤＦ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｅｄ化ｒｄ，?Ｍ２４Ｖ，?９０?ｍｉｎ），用脱脂牛奶（５％）封闭Ｉｈ，用ＩｘＰＢＳＴ洗緣４次，０ｍｉｎ，加入一抗解育过夜（４‘Ｃ），用ｌｘＰＢＳＴ洗涂４次，用....

图６－３锦化Ａｋｔ表达増强雷公藤红素对钢诱导神经细胞调亡抑制作用??Ｆｉｇ．?６－３?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｄｎ－Ａｋｔ?ｅｎｈａｎｃｅｄ?ｉｎｈ化ｉｔｏｒｙ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ??

４Ｅ－ＢＰ１?磯酸化和?Ｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ－３?的增力口，Ｃｅｌａｓｔｒｏｉ?和?Ａｋｔ?ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ?Ｘ?联合对铺??引起的Ａｋｔ、和４Ｅ－ＢＰＩ磯酸化和Ｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ－３増加的抑制作用更明显??（图６－２Ａ）。ＤＡＰＩ实验评价细胞调亡显示，和....

图７－１?ＢＡＰＴＡ／ＡＭ加强雷公藤红素抑制領诱导神经细胞［Ｃａ２＋］ｉ升高??２＋

Ａｋｔ／ｍＴＯ民通路干预细胞调亡，我们在ＰＣ１２细胞和原代神经元中，用ＢＡＰＴＡ／ＡＭ??（２０?ｎＭ）预处理１?１１后再用Ｃｅｌａｓｔｒｏｌ?（１?＾ｉＭ）预处理１?ｈ，接着暴露Ｃｄ?（ｌＯ＾ｉＭ）??２４?ｈ。由图７－１可见，Ｃｅｌａｓｔｒｏｌ和／或ＢＡＰＴＡ／ＡＭ预处理凡乎....

本文编号：3925190