纳米二氧化硅诱导H9c2心肌细胞自噬与凋亡的相互作用

发布时间：2024-03-24 15:30

　　【研究目的】通过检测纳米二氧化硅对心肌细胞的毒性,探究纳米二氧化硅作用于大鼠H9c2心肌细胞所能诱导的自噬与凋亡以及相关机制,明确自噬和凋亡在纳米二氧化硅致心肌细胞毒性过程中对细胞命运的影响及其相互作用,以进一步明确纳米二氧化硅的心脏毒性以应用安全性的评估。【研究方法】选用大鼠H9c2心肌细胞为研究对象,将不染纳米二氧化硅的正常培养的细胞组设为对照组,以制备好的不同浓度的纳米二氧化硅悬浮液(12.5mg/mL、25mg/mL、50mg/mL、100mg/mL、150mg/mL、200mg/mL)作用于H9c2细胞后,采用CCK-8法检测细胞不同浓度染毒后不同时点(6,12,24,28h)的细胞存活率,以确定最稳定的染毒时间和染毒浓度。流式细胞术检测细胞内活性氧水平及细胞凋亡率,免疫荧光法定位并半定量检测细胞内自噬相关蛋白LC3的数量,Hoechst 33342染色通过对细胞凋亡的细胞核进行标记荧光来观察细胞凋亡,Western Blot法检测自噬及凋亡相关蛋白表达。同时设立自噬抑制剂3-MA+100mg/mL纳米二氧化硅组与凋亡抑制剂Z-VAD-FMK+100mg/mL纳米二氧化硅组,...

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号表
绪论
第一部分 纳米二氧化硅对大鼠H9c2心肌细胞的一般毒性
    1.1 材料
        1.1.1 细胞株
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 主要仪器和设备
        1.1.4 主要试剂配制
    1.2 实验方法
        1.2.1 细胞常规培养
        1.2.2 实验分组
        1.2.3 透射电镜与粒度及Zeta电位分析仪对纳米二氧化硅进行表征
        1.2.4 CCK-8 检测H9c2 细胞存活率
        1.2.5 倒置生物显微镜观察细胞形态学变化
        1.2.6 流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平
        1.2.7 免疫荧光法半定量LC3 蛋白表达
        1.2.8 流式细胞术检测细胞凋亡率
        1.2.9 Hoechst33342 细胞凋亡染色
        1.2.10 蛋白免疫印迹法测定蛋白表达
        1.2.11 统计学分析
    1.3 结果
        1.3.1 纳米二氧化硅的表征结果
        1.3.2 纳米二氧化硅对H9c2 心肌细胞的一般毒性作用
        1.3.3 纳米二氧化硅诱导后细胞的形态学变化
        1.3.4 纳米二氧化硅诱导大鼠H9c2 心肌细胞后活性氧水平升高
        1.3.5 纳米二氧化硅诱导大鼠H9c2 心肌细胞自噬
        1.3.6 纳米二氧化硅诱导大鼠H9c2 心肌细胞凋亡
第二部分 纳米二氧化硅诱导大鼠H9c2 心肌细胞自噬与凋亡的相互关系
    2.1 材料
        2.1.1 细胞株
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器和设备
        2.1.4 溶液试剂的制备
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 实验分组
        2.2.3 流式细胞术检测细胞凋亡率
        2.2.4 流式细胞术检测细胞内活性氧水平
        2.2.5 免疫荧光法半定量LC3 蛋白表达
        2.2.6 蛋白免疫印迹法测定蛋白表达
        2.2.7 统计学分析
    2.3 结果
        2.3.1 抑制剂对纳米二氧化硅诱导的H9c2 细胞内活性氧水平的影响
        2.3.2 抑制剂对纳米二氧化硅诱导的H9c2 细胞中凋亡的影响
        2.3.3 抑制剂对纳米二氧化硅诱导的H9c2 细胞中自噬的影响
讨论
结论
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢



本文编号：3937662