邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯的卵巢毒性及其分子机制研究

发布时间：2017-07-01 12:02

  本文关键词：邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯的卵巢毒性及其分子机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：在聚氯乙烯(PVC)等塑料制品的工业生产过程中,通常添加邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(di(2-ethylhexyl)-phthalate,DEHP)用来增加塑料的弹性和韧性。目前DEHP已成为一种全球性的环境污染物,前人诸多研究表明DEHP具有生殖毒性、免疫毒性、神经毒性、三致作用等。为了探讨DEHP的雌性生殖毒性及其分子机制,本研究分别从细胞和动物水平开展实验,首先采用不同剂量DEHP对中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)进行染毒,使用CCK8试剂盒测定DEHP染毒CHO细胞24h和48h的半数抑制浓度IC50,利用荧光定量PCR技术检测DEHP处理24h后细胞凋亡基因(Bcl-2、caspase-8、caspase-9)和癌基因(c-fos、k-ras、p53)m RNA表达水平的改变。然后选择SPF级雌性SD大鼠进行毒性实验,将动物随机分为对照组(玉米油)、DEHP低剂量组(100mg/kg/d)、DEHP中剂量组(500 mg/kg/d)、DEHP高剂量组(1500mg/kg/d)4个剂量组,每组10只,每天灌胃1次,每周5次,连续染毒6周。动物实验结束后称量大鼠体重及卵巢湿重,计算卵巢脏器系数;HE染色后普通光学显微镜观察大鼠卵巢病理改变,透射电子显微镜观察卵巢颗粒细胞超微结构的变化;利用荧光定量PCR技术检测DEHP染毒后大鼠卵巢组织凋亡基因(Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9)和癌基因(c-fos、k-ras、p53)m RNA表达水平的变化。利用Western blot技术检测DEHP染毒后卵巢中激素受体蛋白黄体生成素受体(luteinizing hormone receptor,LHR)和促性腺激素释放激素受体(gonadotropin releasing hormone receptor,Gn RHR)蛋白表达水平的变化。本研究获得如下主要结果:1、DEHP对卵巢细胞的毒性:DEHP染毒CHO细胞24h的IC50为612μmol/L,染毒48h的IC50为336μmol/L。DEHP较高剂量(150μmol/L和300μmol/L)染毒条件下,凋亡基因Bcl-2 m RNA表达水平相较对照组显著降低(p0.05或p0.01);300μmol/L DEHP染毒条件下,caspase-8和caspase-9 m RNA表达水平相较对照组显著升高(p0.05或p0.01);300μM DEHP染毒条件下,p53和k-ras m RNA表达水平相较对照组显著升高(p0.05);c-fos m RNA表达水平与对照组比较无显著差异。2、DEHP对雌性大鼠卵巢的病理损害:DEHP染毒组大鼠卵巢重量和脏器系数相较对照组无显著性差异(p0.05);普通光学显微镜观察卵巢的病理改变,DEHP染毒组均可见初级卵泡中卵母细胞核消失,DEHP中剂量组观察到卵泡闭锁,中剂量和高剂量组观察到卵母细胞周围的颗粒细胞发生排列紊乱和脱落的现象。透射电子显微镜观察卵巢颗粒细胞超微结构的改变,结果显示DEHP染毒组的颗粒细胞中出现线粒体结构异常、核染色质凝聚、形成凋亡小体等凋亡现象,DEHP高剂量组颗粒细胞出现变性坏死的病理改变。3、DEHP对雌性大鼠卵巢组织凋亡基因和癌基因表达水平的影响:DEHP高剂量组Bcl-2 m RNA表达水平相较对照组显著降低(p0.01);Caspase-3、Caspase-8 m RNA表达量在DEHP中剂量组和高剂量组与对照组相比显著升高(p0.01或p0.05);Caspase-9 m RNA表达量在DEHP高剂量组与对照组相比显著升高(p0.05);DEHP染毒组c-fos m RNA表达量与对照组比较均无显著性差异(p0.05);k-ras、p53 m RNA表达量在DEHP中剂量组和高剂量组显著高于对照组(p0.01)。4、DEHP对雌性大鼠卵巢组织中激素受体蛋白LHR和Gn RHR表达的影响:DEHP中剂量组和高剂量组中,LHR蛋白表达水平比对照组下降25%~35%(p0.05或p0.01),Gn RHR蛋白表达水平比对照组下降60%~80%(p0.01)。本研究通过细胞实验和动物实验,获得如下结论:1、细胞实验水平,DEHP染毒引起CHO细胞活力下降,DEHP可能通过内源性线粒体促凋亡途径介导CHO细胞凋亡。高剂量的DEHP处理诱导CHO细胞原癌基因异常表达,提示DEHP可能具有一定程度的致癌效应。2、形态学观察发现DEHP处理引起大鼠卵巢卵泡结构受损,颗粒细胞出现凋亡,高剂量DEHP暴露诱导细胞变性坏死。3、DEHP可能通过内源性线粒体促凋亡途径诱导卵巢颗粒细胞凋亡,同时DEHP可诱导原癌基因的异常表达发挥潜在的致癌效应;DEHP还能通过影响激素受体表达水平引起颗粒细胞凋亡,发挥卵巢毒性。
【关键词】：DEHP 卵巢 凋亡 线粒体 超微结构
【学位授予单位】：深圳大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R114
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 前言11-21
• 1.1 DEHP的物理性质11
• 1.2 DEHP的用途11
• 1.3 DEHP的来源与接触途径11-13
• 1.4 DEHP在人体内的吸收、代谢和排泄13
• 1.5 DEHP的毒性13-21
• 第2章 DEHP对卵巢细胞的毒性研究21-33
• 2.1 实验材料21-22
• 2.2 实验方法22-26
• 2.3 统计学分析26
• 2.4 结果26-31
• 2.5 讨论31-33
• 第3章 DEHP对雌性大鼠卵巢病理损害33-44
• 3.1 实验材料33-34
• 3.2 实验方法34-37
• 3.3 统计学分析37
• 3.4.结果37-41
• 3.5 讨论41-44
• 第4章 DEHP对雌性大鼠基因与蛋白质表达的影响44-59
• 4.1 实验材料44-46
• 4.2 实验方法46-50
• 4.3 统计学分析50
• 4.4 实验结果50-55
• 4.5 讨论55-59
• 结论59-60
• 参考文献60-67
• 附录67-68
• 致谢68-69
• 攻读硕士学位期间的研究成果69-70

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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本文编号：505804