应用内质网应激模型评估纳米银的体内体外毒性

发布时间：2017-07-04 16:19

  本文关键词：应用内质网应激模型评估纳米银的体内体外毒性

  更多相关文章： 纳米银(AgNPs) 毒性 内质网应激

【摘要】：第一部分:目的:探讨纳米银(Ag NPs)对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)毒性效应的影响,为Ag NPs生物安全性的研究提供依据。方法:将不同浓度的Ag NPs(0,6.25,12.5,25,50,60,80μg/m L)和RAW264.7共同培养,8或24 h后采用甲基噻唑基四唑比色法(MTT)法测定各组细胞的活力,选取2.5μg/m L和5μg/m L两个无明显细胞毒性的浓度进行后续研究,检测应激相关基因和蛋白表达的变化;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养液中炎症因子TNF-α和IL-6的表达。结果:用2.5μg/m L和5μg/m L的Ag NPs处理细胞:24 h后相差显微镜下可见纳米颗粒进入细胞内,且5μg/m L组的细胞形态有明显改变;8和24小时后ELISA结果显示IL-6无明显变化,在5μg/m L的24 h处理组TNF-α表达有显著升高,内质网应激相关的基因和蛋白在5μg/m L的24 h处理组表达明显上调。结论:RAW264.7细胞暴露于低剂量的纳米银后表现出明显的应激反应,并且与暴露的剂量和作用的时间存在正相关性;Ag NPs的能够进入RAW264.7细胞,可能是其产生毒性效应的必要条件。低剂量的Ag NPs会干扰细胞的正常生理功能,长期暴露可能产生不可逆的损伤,应引起高度关注。第二部分:目的:研究纳米银经静脉注射后的主要靶器官分布及应激效应,为评估Ag NPs对人体健康和环境的毒性影响提供理论依据。方法:Balb/c小鼠经尾静脉注射不同剂量(0.2、2、5 mg/kg)的Ag NPs 8 h后,检测Ag NPs在体内各器官的生物分布、内质网应激、氧化应激等,评估小鼠暴露Ag NPs后早期毒性效应。结果:应激相关标志性的蛋白质和基因呈剂量依赖性的显著上调,其中在脾、肝、肺、肾中最为明显,并且导致急性毒性反应;表明小鼠暴露于Ag NPs后,脾、肝、肺、肾是Ag NPs毒性的主要靶器官;心脏和脑中也有Ag NPs存在,但本研究并未检测到毒性反应。结论:组织细胞早期暴露于Ag NPs后会产生应激反应,如果应激反应逐步增加可以对靶器官造成永久的毒性损害,提示在Ag NPs的毒性的评估中需认识到应激相关标志物的重要性。
【关键词】：纳米银(AgNPs) 毒性 内质网应激
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R114
【目录】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 第1章 前言12-16
• 第2章 低剂量纳米银对小鼠巨噬细胞RAW264.7 应激效应研究16-37
• 2.1 引言16-17
• 2.2 材料与方法17-28
• 2.2.1 材料与试剂17
• 2.2.2 仪器17-18
• 2.2.3 AgNPs的表征18
• 2.2.4 细胞培养及活力检测18-19
• 2.2.5 细胞形态和摄入状态检测19-20
• 2.2.6 酶联免疫吸附实验（ELISA）20-21
• 2.2.7 荧光定量PCR分析21-23
• 2.2.8 蛋白质印迹法（Western Blot）23-27
• 2.2.9 数据分析27-28
• 2.3 结果28-33
• 2.3.1 AgNPs的TEM28
• 2.3.2 不同浓度的AgNPs对细胞活力的影响28-29
• 2.3.3 细胞形态及AgNPs摄入情况29-30
• 2.3.4 RAW254.7 细胞与AgNPs共培养后相关炎症因子表达情况30-31
• 2.3.5 相关基因的表达情况31-32
• 2.3.6 AgNPs对内质网应激相关蛋白表达的影响32-33
• 2.4 讨论33-36
• 2.5 结论36-37
• 第3章 小鼠单次尾静脉注射纳米银后各器官的生物效应研究37-65
• 3.1 引言37-38
• 3.2 材料与方法38-45
• 3.2.1 材料与试剂38
• 3.2.2 动物处理38-39
• 3.2.3 反转录和实时定量PCR39
• 3.2.4 蛋白质印迹法39-40
• 3.2.5 病理组织学观察（ HE染色）40-41
• 3.2.6 ICP-MS检测纳米颗粒的组织摄入量41-42
• 3.2.7 血液学检测42
• 3.2.8 细胞凋亡分析42-44
• 3.2.9 统计分析方法44-45
• 3.3 结果45-55
• 3.3.1 静脉注射AgNPs后的组织分布45
• 3.3.2 应激水平的评估45-51
• 3.3.3 AgNPs引起组织急性毒性损伤51-55
• 3.4 讨论55-57
• 3.5 结论57-58
• 参考文献58-65
• 第4章 文献综述 AGNPS对哺乳动物的生物安全性研究进展65-73
• 4.1 前言65-66
• 4.2 AGNPS的生物效应研究66-70
• 4.2.1 AgNPs的生物分布66-67
• 4.2.2 潜在的毒性67-70
• 4.3 影响AGNPS毒性的因素70-71
• 4.3.1AgNPs本身特性70-71
• 4.3.2 环境因素71
• 4.4 结语71-73
• 参考文献73-78
• 附录 主要英文缩略语索引78-80
• 硕士期间的研究成果80-81
• 致谢81

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 汪菲;徐维平;杨金敏;王艳萍;张莉;;纳米银的制备进展[J];亚太传统医药;2012年02期

2 张姗姗;薛玉英;唐萌;张婷;刘晓闰;张鹏;张智勇;;纳米银在小鼠体内的组织分布[J];东南大学学报(自然科学版);2012年02期

3 王冬梅;莫遗盛;江晓筠;;纳米银临床应用研究进展[J];中国药房;2007年05期

4 代小英;许欣;陈昭斌;张朝武;;纳米银制备方法概述[J];中国消毒学杂志;2007年06期

5 吴晓玲;郑丽莉;温秀芳;周晓兰;;纳米银凝胶抗菌活性的研究[J];中国药品标准;2007年04期

6 向冬喜;陈娜娜;裘红梅;于增国;景立新;陈英杰;郑丛龙;;纳米银毒理学安全性研究[J];实用医学杂志;2010年11期

7 刘鹏鹏;关荣发;刘明启;黄光荣;戴贤君;;食品用纳米银的毒理学研究进展[J];毒理学杂志;2010年04期

8 常淼;彭秀丽;张庆峰;;纳米银抗菌水凝胶大鼠阴道给药后体内银元素的代谢与分布[J];东南国防医药;2011年02期

9 王芳;毛熙光;;纳米银材料在妇科疾病中的应用[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年16期

10 马守栋;李明春;叶勇;曹恩惠;赵丽艳;;纳米银的制备与表征[J];中国药学杂志;2011年13期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 阴永光;刘景富;江桂斌;;腐殖酸存在下银离子的光还原——纳米银的天然来源?[A];第六届全国环境化学大会暨环境科学仪器与分析仪器展览会摘要集[C];2011年

2 钟海英;;纳米银医用辅料的研究进展[A];铜牛杯第九届功能性纺织品及纳米技术研讨会论文集[C];2009年

3 许利耕;欧阳五庆;李树珍;何欣;;纳米银的制备及其复乳的体外抑菌活性[A];中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会论文摘要集[C];2009年

4 张凤菊;吴霞;;纳米银-多氯联苯共振光散射光谱研究[A];中国化学会第27届学术年会第02分会场摘要集[C];2010年

5 陈国杰;宫永纯;陈延明;沈国良;毛萍丽;袁晓光;;纳米银的制备及应用研究[A];中国颗粒学会第六届学术年会暨海峡两岸颗粒技术研讨会论文集（上）[C];2008年

6 王玉柱;吴希俊;黄家倍;崔平;;纳米银的内耗和模量研究[A];全国第六届固体内耗与超声衰减学术会议论文集[C];2001年

7 莫黎昕;李路海;李亚玲;郝雅玲;乔淑楠;;纳米银胶的合成及其应用性能研究[A];第六届中国功能材料及其应用学术会议论文集（2）[C];2007年

8 巢静波;于素娟;冯迎娣;谭志强;刘睿;阴永光;刘景富;;抗菌产品及环境水样中纳米银和银离子的形态分析[A];第六届全国环境化学大会暨环境科学仪器与分析仪器展览会摘要集[C];2011年

9 黄科;周婧容;郑成斌;侯贤灯;;基于碲化镉量子点阳离子交换放大效应的银及纳米银间接形态分析法[A];中国化学会第28届学术年会第9分会场摘要集[C];2012年

10 张改梅;陈强;许文才;杨福军;邱立强;袁玮;;纳米银改性保鲜膜的抗菌及保鲜性能研究[A];颜色科学与技术——2012第二届中国印刷与包装学术会议论文摘要集[C];2012年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 王秀兰;美环保局加强对纳米银应用监管[N];中国化工报;2006年

2 王秀兰;美社会团体要求对纳米银进行管制[N];中国化工报;2008年

3 名讯;纳米银抗菌家具鉴定会在珠海召开[N];消费日报;2009年

4 本期嘉宾 英国诺丁汉大学无机化学博士 杨继新 北京秦为信诺公关顾问有限公司总经理 殷强;杀菌抗毒的“卫士”[N];中国纺织报;2008年

5 杨林;纳米银给创口消毒带来新的感受[N];中国中医药报;2008年

6 记者 束洪福;10吨纳米银微粉生产线建成[N];科技日报;2005年

7 记者 姜澎;东华大学完成纳米银服装研制[N];文汇报;2010年

8 李琴华;纳米银令细菌无处藏身[N];人民日报;2002年

9 ;纳米银抗菌新型涂料问世[N];中国技术市场报;2010年

10 丛林;嘉丽士漆品种营销双出新[N];中国化工报;2005年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 费阳;载有纳米银的新型复合补片的研制及应用[D];中国人民解放军医学院;2015年

2 唐宝玲;UV型纳米银导电油墨的制备及性能研究[D];华南理工大学;2015年

3 陈世龙;纳米银导电网络的构筑及其对导电复合材料性能的影响[D];华南理工大学;2015年

4 芦冬涛;荧光纳米银的制备及其在环境分析中的应用[D];山西大学;2014年

5 赵昔慧;海藻酸盐原位制备纳米银/海藻纤维及其性能研究[D];青岛大学;2015年

6 吴源;纳米银的生物效应及毒性作用机制[D];中国科学技术大学;2010年

7 陈大鹏;纳米银的可控制备及其应用研究[D];华中科技大学;2010年

8 有传刚;含纳米银的胶原—壳聚糖多孔支架的促进创面修复作用研究[D];浙江大学;2014年

9 张万忠;纳米银的可控制备与形成机制研究[D];华中科技大学;2007年

10 高向华;纳米银/天然高聚物复合抗菌溶胶的合成及其性能研究[D];太原理工大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 李新林;纳米银涂膜液制备及其在海参低温干制品中的应用[D];江南大学;2008年

2 余文娟;纳米银的细胞毒性研究[D];华东师范大学;2009年

3 耿健;创伤创面外用阿杰姆~（？）纳米银敷料后纳米银在体内的分布及毒理安全性研究[D];南方医科大学;2011年

4 王志杰;纳米银及纳米银凝胶的毒性研究[D];华南理工大学;2011年

5 唐婷;纳米银的释放及混凝剂去除的机理研究[D];安徽理工大学;2012年

6 辛琦;纳米银对水生生物的毒性效应及作用机制[D];华东师范大学;2015年

7 熊伟;中药材中重金属提取及检测方法研究[D];昆明理工大学;2015年

8 熊文;利用细菌介导制备纳米银的研究[D];东北林业大学;2015年

9 张映;钩状木霉生物还原制备纳米银的研究[D];东北林业大学;2015年

10 杨宇;纸基纳米银喷墨导电油墨的制备及其性能研究[D];华南理工大学;2015年

，

本文编号：518470