二甲基甲酰胺通过线粒体通路诱导H9c2心肌细胞凋亡的实验研究

发布时间：2017-07-07 22:17

  本文关键词：二甲基甲酰胺通过线粒体通路诱导H9c2心肌细胞凋亡的实验研究

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【摘要】：目的探讨线粒体通路是否参与了二甲基甲酰胺(DMF)诱导H9c2心肌细胞凋亡的过程,以及细胞氧化还原水平的改变与该与通路的激活是否有关。方法观察DMF对H9c2心肌细胞形态以及核形态的影响。用western blotting(WB)检测不同剂量DMF(0 m M,50 m M,100 m M,200 m M)染毒24h后胞浆内全长Caspase-3(Procaspase-3)、活化的Caspase-3(Cleaved caspase-3)、全长Caspase-9(Procaspase-9)、Bax、Bcl-2、细胞色素C(Cyt-c)水平的改变;检测200 m M DMF染毒不同时间后(0h,2h,4h,8h,12h,24h)以及4 m M N-乙酰半胱氨酸(NAC)预作用1h继而200 m M DMF作用24h后胞浆内Cleaved caspase-3,Bcl-2,Cyt-c水平的变化。采用免疫荧光细胞化学法(IFC)对200 m M DMF染毒不同时间后(0h,2h,4h,8h,12h,24h)以及4 m M NAC干预1h继而200 m M DMF染毒24h后细胞内Cyt-c进行定位,观察细胞内Cyt-c的变化动态。结果200 m M DMF染毒24h后大部分细胞皱缩、部分细胞变圆并脱离培养瓶壁悬浮到培养基中;部分细胞核染色质出现不同程度的浓缩现象。不同剂量DMF(0 m M,50 m M,100 m M,200 m M)染毒24h后胞浆Procaspase-3和Bax水平有升高,Procaspase-9和Bcl-2水平降低,Cleaved caspase-3和Cyt-c水平升高,组间差异有统计学意义(Procaspase-3:F=16.11,P=0.0009;Bax:F=60.31,P0.0001;Procaspase-9:F=16.66,P=0.0008;Bcl-2:F=577.8,P0.0001;Cleaved caspase-3:F=23.33,P=0.0003;Cyt-c:F=104.0,P0.0001)。Procaspase-3、Bax在50 m M、100 m M染毒组较对照组升高,差异有统计学意义(P0.05),200 m M染毒组与对照组相比差异无统计学意义。Procaspase-9在50 m M、100 m M染毒组较与对照组相比差异无统计学意义,200 m M染毒组较对照降低,差异有统计学意义(P0.05)。Bcl-2水平在50 m M、100 m M、200 m M染毒组较对照组均降低,差异有统计学意义(P0.05)。Cleaved caspase-3和Cyt-c水平在100 m M、200 m M染毒组较对照组升高,差异有统计学意义(P0.05)。Cleaved caspase-3/Total caspase-3和Bax/Bcl-2比值增加,100 m M,200 m M组较对照组差异有统计学意义(P0.05)。200 m M DMF染毒不同时间后(0h,2h,4h,8h,12h,24h)胞浆内Cleaved caspase-3,Cyt-c水平升高,Bcl-2水平降低,组间差异均有统计学意义(Cleaved caspase-3:F=503.7,P0.0001;Cyt-c:F=51.42,P0.0001;Bcl-2:F=73.37,P0.0001)。Cleaved caspase-3水平在200 m M DMF染毒后各时间点较对照组均升高,差异均有统计学意义(P0.05)。Cyt-c水平在200 m M DMF染毒2h,4h,8h时间点与对照组相比差异无统计学意义,12h、24h时间点较对照组升高,差异有统计学意义(P0.05)。Bcl-2水平在在200 m M DMF染毒后各时间点较对照组降低,差异有统计学意义(P0.05)。4 m M NAC干预1h继而200 m M DMF染毒24h、200 m M DMF染毒24h、4 m M NAC单独干预1h和对照组组间Cleaved caspae-3、Cyt-c、Bcl-2水平差异有统计学意义(Cleaved caspase-3:F=28.98,P0.0001;Cyt-c:F=26.14,P=0.0002;Bcl-2:F=18.52,P=0.0006)。4 m M NAC干预1h继而200 m M DMF染毒24h后Cleaved caspase-3、Cyt-c水平较200 m M DMF染毒组降低,差异有统计学意义(P0.05)。4 m M NAC干预1h继而200 m M DMF染毒24h后Bcl-2水平较200 m M DMF染毒组升高,然而差异无统计学意义。IFC检测发现对照组大部分细胞中Cyt-c呈粒点状分布在胞浆中,单独Cyt-c荧光染色可见细胞核轮廓清晰,随着染毒时间的延长几乎所有细胞的Cyt-c弥散分布于胞浆中,核轮廓越来越模糊。4 m M NAC干预1h继而200 m M DMF染毒24h后少部分细胞胞浆内可见Cyt-c随线粒体呈粒点状分布,且单独Cyt-c荧光染色时可见细胞核轮廓变清晰。结论DMF染毒后可上调胞浆中Cleaved caspase-3、Cyt-c水平,下调Bcl-2水平,Cleaved caspase-3/Total caspase-3以及Bax/Bcl-2比值增加。线粒体通路参与了DMF诱导的H9c2心肌细胞的凋亡过程,该通路的激发与心肌细胞氧化还原水平的改变有关。
【关键词】：二甲基甲酰胺 心肌细胞 凋亡 线粒体通路 N-乙酰半胱氨酸
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R114
【目录】：

• 缩略词表5-6
• 摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 1 前言10-13
• 2 材料与方法13-21
• 3 结果21-34
• 3.1 细胞及细胞核形态观察21-22
• 3.2 线粒体凋亡通路相关蛋白检测22-31
• 3.3 免疫荧光细胞化学对胞内Cyt-c定位31-34
• 4 讨论34-38
• 5 结论38-39
• 参考文献39-44
• 附录44-45
• 致谢45-46
• 综述46-57
• 摘要46
• Abstract46-47
• 一、 DMF 代谢与毒性47
• 二、 DMF 毒性47-52
• 三、 DMF 职业中毒治疗与预防52-53
• 参考文献53-57

【引证文献】

中国重要会议论文全文数据库 前2条

1 马龙;周晓娟;陈静;董家新;刘义;;二甲基甲酰胺对大鼠肝脏线粒体生理功能的影响[A];第十七届全国化学热力学和热分析学术会议论文集[C];2014年

2 王洁茹;菅向东;;二甲基甲酰胺接触性皮炎2例[A];第十三次全国劳动卫生与职业病学术会议论文汇编[C];2014年

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本文编号：532057