亚硝酸盐暴露致海马损伤和不孕效应的研究

发布时间：2017-07-19 14:08

  本文关键词：亚硝酸盐暴露致海马损伤和不孕效应的研究

  更多相关文章： Brd U 细胞凋亡 氧化应激 NO信号通路 不孕

【摘要】：哺乳动物的海马位于脑颞叶内,是组成中枢神经系统的一部分,在日常学习和记忆形成等生理过程中起到重要作用。亚硝酸盐作为食品添加剂,人们在日常生活接触的机率较高,并且,亚硝酸盐作为小分子物质,可透过胎盘屏障,会对胎儿产生影响。基于海马重要的生理功能,我们对孕期亚硝酸盐暴露是否会对仔鼠海马造成损伤进行了研究。同时,在建模的过程中,通过实验手段探讨了亚硝酸盐的不孕效应。目的:①探讨孕期亚硝酸盐暴露对仔鼠海马损伤的作用;②探讨亚硝酸盐的不孕效应。方法:①孕期亚硝酸盐暴露模型的建立:将孕鼠分为对照组(生理盐水)、低剂量亚硝酸盐组(60 mg/kg)和高剂量亚硝酸盐组(120 mg/kg)。收集P0(postnatal day 0)、P7(postnatal day 7)、P14(postnatal day 14)、P30(postnatal day 30)各年龄点仔鼠大脑,用于免疫组织荧光染色、彗星实验、Western blotting蛋白半定量分析,以对海马损伤进行研究;②雌鼠亚硝酸盐暴露模型的建立:将雌鼠也分为对照组、低剂量亚硝酸盐组、高剂量亚硝酸盐组,然后对亚硝酸盐暴露后雌鼠的不孕率进行统计;收集对照组和暴露组卵巢,用HE染色法观察卵巢内部结构及各级卵泡数目的变化;用TUNEL试剂盒和Western blotting蛋白半定量分析对卵泡内颗粒细胞凋亡进行检测。结果:①孕期亚硝酸盐暴露对仔鼠海马损伤的影响:不论是暴露组还是对照组,仔鼠齿状回增殖的神经干细胞数目均随着年龄的增长逐渐减少;在P0、P7、P14和P30年龄点,暴露组仔鼠增殖的神经干细胞的数量明显比对照组少,且具有剂量依赖性(P0.05,n=96),为了鉴别这种抑制作用是否具有选择性,我们对P0仔鼠室管膜下区神经干细胞的增殖情况进行了观察,结果发现暴露组室管膜下区的神经干细胞增殖较对照组也减少,同样具有剂量依赖性(P0.05);暴露组仔鼠发生了氧化应激且门区凋亡细胞的数目比对照组多,具有剂量依赖性(P0.05);彗星实验结果显示:暴露组P0仔鼠海马细胞的彗尾比对照组长,具有剂量依赖性(P0.01);与对照组P0仔鼠相比,暴露组仔鼠海马组织内Caspase 8和NF-κB蛋白的表达量较高(P0.05);②亚硝酸盐暴露的不孕效应:亚硝酸盐暴露可致不孕且具有剂量依赖性(P0.05,n=66);亚硝酸盐暴露可诱导机体产生氧化应激反应、可使卵泡内颗粒细胞凋亡增加(P0.01,n=20)。结论:①孕期亚硝酸盐暴露可通过诱导氧化应激、抑制神经干细胞增殖、促进细胞凋亡而对仔鼠海马造成损伤。②亚硝酸盐可通过促进颗粒细胞凋亡引起卵泡闭锁进而导致雌鼠不孕。
【关键词】：Brd U 细胞凋亡 氧化应激 NO信号通路 不孕
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R114
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 第一部分：孕期亚硝酸盐暴露对仔鼠海马损伤的作用11-39
• 引言11-13
• 1 材料、仪器与方法13-21
• 1.1 实验试剂13
• 1.2 常用试剂配方13-16
• 1.3 主要仪器16
• 1.4 动物模型与分组16-17
• 1.4.1 动物16-17
• 1.4.2 孕期亚硝酸盐暴露模型的建立及分组17
• 1.5 振荡切片的制备及免疫组织化学染色17
• 1.6 BrdU标记技术17-18
• 1.7 彗星实验18
• 1.8 Western blotting检测Caspase8、NF-κB蛋白表达量18-19
• 1.9 统计学处理19-21
• 2 结果21-29
• 2.1 孕期暴露与仔鼠海马齿状回神经干细胞增殖21-23
• 2.2 孕期暴露与仔鼠氧化应激的发生23-25
• 2.3 孕期暴露与仔鼠海马门区细胞凋亡25-29
• 3 讨论29-31
• 3.1 孕期暴露与仔鼠神经干细胞的增殖29
• 3.2 孕期暴露与氧化应激和细胞凋亡29-31
• 4 参考文献31-33
• 5 附图及图版说明33-37
• 6 结论37-39
• 第二部分：亚硝酸盐不孕效应的实验性研究39-55
• 引言39-41
• 1 材料、仪器与方法41-45
• 1.1 实验试剂41
• 1.2 主要仪器41
• 1.3 动物模型建立与分组41-42
• 1.4 石蜡切片的制备42
• 1.5 HE染色42
• 1.6 TUNEL免疫荧光标记法42
• 1.7 Western blotting检测细胞内的Caspase 8、c-fos蛋白含量42-43
• 1.8 统计学处理43-45
• 2 结果45-47
• 2.1 亚硝酸盐暴露的致不孕情况45
• 2.2 亚硝酸盐暴露与卵泡发育45
• 2.3 亚硝酸盐暴露后卵泡内颗粒细胞凋亡情况45-47
• 3 讨论47-49
• 3.1 亚硝酸盐的不孕效应与氧化应激47
• 3.2 亚硝酸盐的不孕效应与卵泡凋亡47-49
• 4 参考文献49-51
• 5 附图及图片说明51-53
• 6 结论53-55
• 综述55-65
• 1 机体内NO的来源55-56
• 2 NO的生理功能56-58
• 2.1 NO促进血管扩张56-57
• 2.2 NO抑制血小板聚集57
• 2.3 NO对细胞增殖的影响57
• 2.4 NO对细胞凋亡的影响57-58
• 3 NO的病理学作用58-61
• 3.1 NO与癌症58-59
• 3.2 NO与心血管疾病59
• 3.3 NO与Ⅱ型糖尿病59-60
• 3.4 NO与不孕症60-61
• 参考文献61-65
• 附录65-67
• 攻读学位期间发表学术论文目录67-69
• 致谢69-70

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8 刘恩梅,杨锡强;细胞凋亡及其影响因素[J];重庆医学;1998年01期

9 ;美开发调控细胞凋亡药物[J];中国肿瘤;1999年07期

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3 刘二龙;袁慧;;锌与细胞凋亡[A];2003全国家畜内科学学术研讨会论文专辑[C];2003年

4 邱洁;高海青;;锌在细胞凋亡中的作用研究进展[A];山东省微量元素科学研究会第三届学术研讨会论文汇编[C];2006年

5 俞雅萍;;细胞凋亡的机制及途径和影响因素[A];华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集[C];2006年

6 于青;袁伟杰;姚建;;晚期糖基化终末产物引起足细胞凋亡的机制[A];2007年浙沪两地肾脏病学术年会资料汇编[C];2007年

7 季宇彬;尹立;汲晨锋;;调控细胞凋亡的线粒体因素[A];肿瘤病因学研究与中西医结合肿瘤综合诊疗交流研讨会论文集[C];2009年

8 吴经纬;汤长发;;运动中细胞凋亡的线粒体变化特征[A];湖南省生理科学会2006年度学术年会论文摘要汇编[C];2007年

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1 商东;“细胞凋亡”与临床医学[N];中国医药报;2001年

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5 李明辉;“细胞凋亡”治癌症[N];医药导报;2002年

6 洪敏;细胞凋亡研究引人关注[N];中国医药报;2008年

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