食品中志贺活菌叠氮溴乙锭实时荧光聚合酶链反应技术研究

发布时间：2017-08-03 20:19

  本文关键词：食品中志贺活菌叠氮溴乙锭实时荧光聚合酶链反应技术研究

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【摘要】：目的利用叠氮溴乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)实时荧光聚合酶链反应(PCR)技术,建立一种简便、快速、特异、灵敏的在食品中检测志贺活菌的方法。方法根据志贺菌ipa H基因保守序列设计特异性引物和探针。用不同EMA浓度、不同光照次数优化样品EMA前处理条件。用已知菌验证志贺活菌检测的敏感性和志贺死菌检测的抑制性。用31株志贺菌、26株单增李斯特菌、24株沙门菌、25株副溶血弧菌、11株阪崎肠杆菌、10株致病性大肠埃希菌和1株大肠埃希菌验证方法的特异性和稳定性。同时用本研究方法和常规分离培养法,对30件模拟样品进行实样验证。结果志贺活菌EMA实时荧光PCR方法的循环阈值(Ct)=32.10~3.19×log(菌量)(R2=0.994)。最低检测浓度为2.20 CFU/反应。对死菌DNA抑制效率≥99.97%。31株志贺菌Ct值最低为15.04,最高为26.54,而97株非志贺菌的Ct值均35或无Ct值(呈一条直线)。重复试验Ct值变异系数3。30件模拟样品采用本研究方法和常规分离培养法的检测结果一致,但采用EMA实时荧光PCR方法耗时不超过7.5 h,而常规分离培养方法则需要3~5 d。结论 EMA实时荧光PCR技术是一种快速简便、特异性强、灵敏度高、仅检测志贺活菌的方法,建议在食品检测中推广应用。
【作者单位】： 浙江省疾病预防控制中心;
【关键词】： 食品 志贺菌 叠氮溴乙锭 实时荧光PCR
【基金】：浙江省公益类科技计划项目(No.2015C37058)~~
【分类号】：R155.5
【正文快照】： 作者单位:浙江省疾病预防控制中心,浙江杭州310051Corresponding author:CHENG Su-yun,Email:llmei@cdc.zj.cn志贺菌可引起细菌性痢疾和食物中毒,全球每年因志贺菌感染的人次估计为1.65亿,可造成110万人死亡,细菌性痢疾的发病率和死亡率均居感染性腹泻之首位[1]。细菌性痢疾是

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