维生素D对母鼠围生期双酚A暴露所致子代Treg细胞减少的影响

发布时间：2017-08-14 04:33

  本文关键词：维生素D对母鼠围生期双酚A暴露所致子代Treg细胞减少的影响

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【摘要】：研究背景环境内分泌干扰化学物(environmental endocrine disrupting chemical,EDC)双酚A(Bisphenol A,BPA)是工业上合成聚碳酸酯和环氧树脂的主要单体,广泛应用于奶瓶、食品和饮料包装材料等人类日常生活用品,医疗设备以及热敏纸等的制造。随着需求量的日益增加,BPA已经成为世界上高产量化学物之一。在遇到酸、碱或加热情况下,BPA会从这些物品中释放出来,经消化道、呼吸道和皮肤等多种途径进入人体,人群调查显示人类已广泛暴露于环境BPA。BPA具有弱雌激素活性,对机体内分泌、神经行为、生殖发育等可产生不良影响,严重威胁着人类的健康。近年来的研究发现围生期母体BPA暴露对子代出生后免疫功能有明显影响,如改变CD4+T细胞亚群辅助性T细胞(T helper cell,Th)1和Th2的平衡,减少调节性T细胞(T regulation cell,Treg)等。但是有关BPA发育免疫毒作用的干预研究的报道较少。维生素D(Vitamin D,Vit D)是机体生长发育所必需的一类维生素,研究显示Vit D在免疫应答中也发挥重要的调节作用。到目前为止,Vit D对围生期BPA暴露引起的子代Treg细胞减少有何影响尚不清楚。研究目的研究不同剂量Vit D补充对围生期BPA暴露母鼠所生子代出生后脾脏Treg细胞数量减少、特异性转录因子FOXP3 mRNA表达水平下调及血清中Treg细胞分泌的白介素(interleukin,IL)-10和炎性因子IL-1以及肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α含量降低的改变,探讨Vit D补充对母鼠围生期BPA暴露所致子代Treg细胞减少的影响。研究方法8周龄icr雌鼠和9周龄icr雄鼠适应性饲养1周,交配并查到阴栓确认为受孕。将孕鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组、1000nmbpa暴露组、1000nmbpa+0.25μg/kgvitd组、1000nmbpa+1μg/kgvitd组、1000nmbpa+4μg/kgvitd组。母鼠自怀孕第1天(gestationday1,gd1)至子代出生后(postnatalday,pnd)21天,每天经饮水摄入bpa,同期每天经腹腔注射给予不同剂量vitd。子代在pnd21和pnd42时,分别采集外周血用酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,elisa)检测血清il-10、il-1和tnf-α含量;处死仔鼠,无菌取脾脏,部分制成细胞悬液用流式细胞仪(flowcytometry,fcm)测定treg细胞数量,部分用于提取mrna用实时荧光定量聚合酶链反应(realtime-quantitativepolymerasechainreaction,rt-qpcr)分析treg细胞特异转录因子foxp3mrna表达水平,实验结果用spss13.0统计软件包进行统计分析。结果1.一般情况整个试验期间,各组孕鼠一般情况良好,孕期未观察到流产、死胎、死产和母鼠死亡现象,母鼠体重增长各组间差异无统计学意义;子代出生至断乳期间(pnd21)子鼠的平均窝仔数、平均体重各组间差异均无统计学意义;pnd42时除1000nmbpa暴露组子鼠体重高于空白对照组且差异有统计学意义(p0.05)外,其余各组间体重差异均无统计学意义。2.vitd补充对母鼠围生期bpa暴露所致子代脾脏treg细胞数量减少的影响母鼠围生期饮水摄入1000nmbpa引起子代出生后脾脏treg细胞数量明显减少,1000nmbpa暴露组母鼠所生子代脾脏treg细胞数量,pnd21时与空白对照组比较明显减少(p0.01),pnd42时差异无统计学意义。同期补充vitd对母鼠围生期饮水摄入1000nmbpa引起的子代脾脏treg细胞数减少具有一定的改善作用,且具有剂量效应关系。pnd21时,中剂量vitd补充组母鼠所生子代脾脏treg细胞数较1000nmbpa暴露组有所上升(p0.05),高剂量vitd补充组母鼠所生子代脾脏treg细胞数与1000nmbpa暴露组比较明显上升(p0.01),且与空白对照组比较差异无统计学意义。pnd42时,各组母鼠所生子代脾脏treg细胞数组间差异均无统计学意义。3.vitd补充对母鼠围生期bpa暴露所致子代脾脏foxp3mrna表达下调的影响母鼠围生期饮水摄入1000nmbpa可引起子代出生后脾脏foxp3mrna表达下调,1000nmbpa暴露组母鼠所生子代脾脏foxp3mrna表达水平,在pnd21时较空白对照组明显减少(p0.01),pnd42时与空白对照组相比差异无统计学意义。同期补充vitd对母鼠围生期饮水摄入1000nmbpa所引起的子代脾脏foxp3mrna表达下调具有一定的抑制作用,且呈剂量效应关系。pnd21时,高剂量vitd补充组母鼠所生子代脾脏foxp3mrna表达水平,与1000nmbpa暴露组比较明显上升(p0.05),且与空白对照组比较差异无统计学意义。pnd42时,各组母鼠所生子代脾脏foxp3mrna表达水平组间差异均无统计学意义。4.vitd补充对母鼠围生期bpa暴露所致子代血清treg细胞分泌的细胞因子il-10含量降低的影响母鼠围生期饮水摄入1000nmbpa可引起子代出生后血清中il-10含量降低,1000nmbpa暴露组母鼠所生子代血清il-10含量,在pnd21时与空白对照组比较明显降低(p0.01),pnd42时与空白对照组相比差异无统计学意义。同期补充vitd对母鼠围生期饮水摄入1000nmbpa所引起的子代血清il-10含量降低具有一定的抑制作用,且呈剂量效应关系。pnd21时,高剂量vitd补充组母鼠所生子代血清il-10含量,与1000nmbpa暴露组比较明显上升(p0.05),且与空白对照组差异无统计学意义。pnd42时,各组母鼠所生子代血清il-10含量组间差异均无统计学意义。5.vitd补充对母鼠围生期bpa暴露所致子代血清炎性因子il-1和tnf-α含量升高的影响母鼠围生期饮水摄入1000nmbpa可引起子代出生后血清中炎性因子il-1和tnf-α含量升高,1000nmbpa暴露组母鼠所生子代血清il-1和tnf-α含量,在pnd21时与空白对照组比较明显升高(p0.01),pnd42时与空白对照组差异无统计学意义。同期补充Vit D对母鼠围生期饮水摄入1000 nM BPA所引起的子代出生后血清IL-1和TNF-α含量升高具有一定的抑制作用,且呈剂量效应关系。在PND21时,中剂量Vit D补充组母鼠所生子代血清IL-1含量,与1000 nM BPA暴露组比较有所下降(P0.05),高剂量Vit D补充组母鼠所生子代血清IL-1含量与1000 nM BPA暴露组比较明显下降(P0.01),且与空白对照组比较差异无统计学意义;高剂量Vit D补充组母鼠所生子代血清TNF-α含量与1000 nM BPA暴露组比较明显下降(P0.01),且与空白对照组差异无统计学意义;在PND42时,各组母鼠所生子代血清IL-1和TNF-α含量组间差异均无统计学意义。结论1.母鼠围生期经水摄入BPA可导致子代出生后不同时期Treg细胞数量减少、特异性转录因子Foxp3 mRNA表达下调、血清中Treg细胞分泌的细胞因子IL-10含量降低以及炎性因子IL-1和TNF-α含量升高。2.Vit D补充对母鼠围生期BPA暴露引起的子代出生后Treg细胞改变具有一定的抑制作用,可抑制母鼠BPA暴露所致子代Treg细胞数量的减少、Foxp3 mRNA表达的下调、血清中Treg细胞分泌的细胞因子IL-10含量的降低,以及炎性因子IL-1和TNF-α含量的升高,而且呈剂量效应关系。3.围生期补充适当剂量的Vit D可能增加Treg细胞的数量或(和)提高其功能,从而对环境BPA暴露引起的发育免疫毒性产生一定的抑制作用。
【关键词】：双酚A 维生素D Treg细胞 发育免疫毒性
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R114
【目录】：

• 缩略词表5-7
• 中文摘要7-11
• 英文摘要11-16
• 1 引言16-18
• 2 材料与方法18-22
• 3 结果22-36
• 4 讨论36-41
• 5 结论41-42
• 参考文献42-48
• 个人简历48-49
• 致谢49-50
• 综述50-63
• 参考文献58-63

【参考文献】

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1 焦凤茹;孙秀娟;庞振涛;;双酚A市场分析[J];化学工业;2008年09期

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本文编号：670811