铜绿假单胞杆菌核酸传感器及逻辑门的研究

发布时间：2017-08-14 04:32

  本文关键词：铜绿假单胞杆菌核酸传感器及逻辑门的研究

  更多相关文章： 铜绿假单胞杆菌 毒素基因 多重LAMP 核酸传感器 逻辑门 现场检测

【摘要】：铜绿假单胞杆菌造成的污染问题日趋严重,而传统培养基培养和PCR检测铜绿假单胞杆菌的方法所需时间长、操作复杂,不能满足现场快速检测的要求。因此,寻求更加经济高效的检测方法非常有必要。本研究针对铜绿假单胞杆菌的内标及毒素基因进行引物设计筛选,并通过多重LAMP反应和胶体金核酸传感器结合对铜绿假单胞杆菌及其毒素进行多重检测。系统优化后该方法可以在50分钟内不依赖复杂的大型仪器对铜绿假单胞杆菌及其毒素进行检测,检测限为20 CFU/mL,比PCR检测技术更灵敏。同时,将本研究开发的方法应用于分子逻辑门,并进行自然界水体的实际样品检测。本研究结果如下：1.建立铜绿假单胞杆菌及其毒素的等温扩增检测方法。筛选出针对铜绿假单胞杆菌两种重要的外毒素基因和内标基因的特异性引物用于LAMP方法,结果证实该方法可以用来在突发情况下或者常规监测研究中,鉴定饮用水和环境中铜绿假单胞杆菌外毒素的存在性,以判断其毒性潜力和调查其致病性。2.建立了多重LAMP与胶体金核酸传感器结合同时检测多种基因的方法。将已筛选出的针对铜绿假单胞杆菌两种重要的外毒素基因和内标基因的特异性引物应用于多重LAMP体系,结合胶体金核酸传感器检测,验证了该方法的可行性,并对传感器的制备进行优化以提高检测性能,最终达到现场检测的目的。3. 建立多重胶体金核酸传感器逻辑门。应用已建立的多重LAMP与胶体金核酸传感器结合同时检测多种基因的方法,以铜绿假单胞杆菌内标基因及两种毒素基因DNA为输入条件,以胶体金核酸传感器的红色条带信号为输出,建立了YES、AND、OR、INHIBIT、NOR逻辑门；应用所建立的多重胶体金核酸传感器OR逻辑门,对饮用水进行铜绿假单胞杆菌及其毒素基因的检测。
【关键词】：铜绿假单胞杆菌 毒素基因 多重LAMP 核酸传感器 逻辑门 现场检测
【学位授予单位】：中国农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R123.1;TP212
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-6
• 主要仪器设备表6-7
• 缩略词表7-10
• 第一章 绪论10-27
• 1.1 食品微生物安全现状10-11
• 1.2 食品微生物检测技术的研究概况11-20
• 1.2.1 微生物传统检测技术11
• 1.2.2 微生物试纸片检测技术11-12
• 1.2.3 微生物代谢物检测技术12-13
• 1.2.4 微生物免疫学检测技术13-14
• 1.2.5 微生物DNA检测技术14-18
• 1.2.6 微生物传感器检测技术18-20
• 1.3 铜绿假单胞杆菌污染及检测现状20-26
• 1.3.1 铜绿假单胞杆菌风险因子的研究21
• 1.3.2 铜绿假单胞杆菌感染机制途径与症状21-22
• 1.3.3 铜绿假单胞杆菌耐药性相关研究22-23
• 1.3.4 铜绿假单胞杆菌污染情况23-24
• 1.3.5 国内外铜绿假单胞杆菌检测方法的研究进展24-26
• 1.4 研究目的和研究内容26-27
• 1.4.1 研究目的26
• 1.4.2 研究内容26-27
• 第二章 铜绿假单胞杆菌及其毒素的LAMP检测方法的研究27-36
• 2.1 材料与试剂27-29
• 2.1.1 菌株27
• 2.1.2 主要试剂及配制27-29
• 2.2 实验方法29-32
• 2.2.1 微生物培养29
• 2.2.2 环境及饮用水中铜绿假单胞杆菌的分离及生化鉴定29-30
• 2.2.3 细菌基因组DNA的提取30-31
• 2.2.4 引物设计31
• 2.2.5 铜绿假单胞杆菌基因组的扩增31-32
• 2.3 结果与分析32-35
• 2.3.1 铜绿假单胞杆菌基因组DNA的提取33
• 2.3.2 引物的验证33-34
• 2.3.3 引物特异性验证34
• 2.3.4 铜绿假单胞杆菌及非铜绿假单胞杆菌外毒素基因的LAMP检测34
• 2.3.5 饮用水及环境样本中铜绿假单胞杆菌外毒素基因的LAMP检测34-35
• 2.4 讨论35-36
• 第三章 多重LAMP与胶体金核酸传感器结合的检测方法的建立36-48
• 3.1 材料与试剂36-38
• 3.1.1 试剂与耗材36-37
• 3.1.2 试剂及引物37
• 3.1.3 相关溶液配置37-38
• 3.2 实验方法38-40
• 3.2.1 基因组的提取与扩增38-39
• 3.2.2 核酸传感器的制备39-40
• 3.2.3 铜绿假单胞杆菌内标基因及毒素基因的多重检测40
• 3.3 结果与分析40-47
• 3.3.1 多重LAMP与核酸传感器结合的方法建立40-43
• 3.3.2 核酸传感器的优化43-45
• 3.3.3 核酸传感器性能检测45-47
• 3.4 讨论47-48
• 第四章 铜绿假单胞杆菌及其毒素胶体金核酸传感器逻辑门的建立48-60
• 4.1 材料与试剂48-49
• 4.1.1 试剂与耗材48
• 4.1.2 仪器与器材48
• 4.1.3 相关溶液配置48-49
• 4.2 实验方法49-50
• 4.2.1 基因组的提取与扩增49-50
• 4.2.2 核酸传感器的制备50
• 4.3 结果与分析50-59
• 4.3.1 逻辑门的实验原理50-58
• 4.3.2 OR逻辑门在饮用水样本中铜绿假单胞杆菌外毒素基因检测中的应用58-59
• 4.4 讨论59-60
• 第五章 结论与展望60-62
• 参考文献62-67
• 致谢67-68
• 个人简介68

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 孙声桃;陈祖基;丁行振;赵宇;岳娟;刘双;;抗菌药物对眼部铜绿假单胞杆菌防突变浓度的测定[J];眼科研究;2006年04期

2 周斯博;张智红;Onega V Ulianova;Sergey S Ulyanov;骆清铭;;光动力作用对铜绿假单胞杆菌杀伤效应的研究[J];激光生物学报;2006年05期

3 黄晓敏;李海妙;罗宝正;管文华;林少芸;王明明;;茶树精油对铜绿假单胞杆菌生物膜的抑制作用[J];现代预防医学;2012年18期

4 乔刚;下呼吸道感染铜绿假单胞杆菌的检测及药敏分析[J];青岛医药卫生;1999年03期

5 童一民;潘欣;荣光华;戚中田;;铜绿假单胞杆菌QS相关基因差异表达的研究[J];微生物学通报;2006年06期

6 朱建洲;王景顺;刘爱卿;;重症监护室铜绿假单胞杆菌药物敏感性研究[J];中国煤炭工业医学杂志;2006年11期

7 张婷婷;孙莉萍;;1例浓钠外渗创面合并铜绿假单胞杆菌感染的患者护理[J];齐齐哈尔医学院学报;2010年21期

8 张群,邢丽丽;铜绿假单胞杆菌致骨髓炎一例[J];疾病控制杂志;1997年02期

9 金霞;;0.02%醋酸氯己定治疗铜绿假单胞杆菌感染性角膜炎效果分析[J];中国乡村医药;2011年03期

10 ;[J];;年期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 何江明;;神经外科中铜绿假单胞杆菌的流行病学特点及其耐药率分析[A];2011中华医学会神经外科学学术会议论文汇编[C];2011年

中国硕士学位论文全文数据库 前3条

1 陈玉婷;铜绿假单胞杆菌核酸传感器及逻辑门的研究[D];中国农业大学;2016年

2 蒋勇兵;低浓度鼠李糖脂作用下铜绿假单胞杆菌在玻璃珠介质中的吸附和传输[D];湖南大学;2014年

3 范华昊;耐药性嗜麦芽窄食单胞菌和绿脓杆菌噬菌体初步应用研究[D];中南大学;2013年

，

本文编号：670807