无细胞百日咳纯化抗原中Triton X-100残留量检测方法的建立及验证
本文关键词：无细胞百日咳纯化抗原中Triton X-100残留量检测方法的建立及验证
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【摘要】：目的建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测无细胞百日咳纯化抗原中Triton X-100残留量,并对该方法进行验证及初步应用。方法 HPLC条件:Agilent SB 300 C18色谱柱(规格:4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:纯化水与甲醇的体积比为20㑳80;检测波长:225 nm;色谱柱温:30℃;流速:0.8 ml/min;进样量:10μl。对方法的系统适应性、专属性、线性、准确性、精密性、耐用性及定量限进行验证,并用建立的方法检测6批无细胞百日咳纯化抗原中的Triton X-100残留量。结果该方法检测6份10μg/ml Triton X-100的理论塔板数在1 550~1 580之间,Triton X-100峰面积和保留时间的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)分别为2.59%和0.04%;12μg/ml的Triton X-100溶液和无细胞百日咳纯化抗原样品中,Triton X-100能与其他物质完全分离;在2~30μg/ml范围内,Triton X-100浓度与峰面积呈良好的线性关系(r2=0.999 01);该方法检测不同浓度Triton X-100样品的加标回收率均在98%~102%之间,RSD均不超过2%;同一实验人员在不同工作日和不同检测人员在同一工作日用该方法检测供试品中Triton X-100含量的RSD均小于4%;改变流动相的甲醇比例和柱温后,6次检测值的RSD分别为0.95%和0.51%;定量限可达0.5μg/ml。该方法检测6批无细胞百日咳纯化抗原中的Triton X-100残留量均较低。结论建立的HPLC法系统适应性、专属性、线性、准确性、精密性、耐用性良好,可用于无细胞百日咳纯化抗原中Triton X-100残留量的定量检测。
【作者单位】： 成都生物制品研究所有限责任公司;
【关键词】： 高效液相色谱 无细胞百日咳抗原 Triton X-
【基金】：“重大新药创制”专项“疫苗综合性技术研究开发大平台建设”课题下所属的子课题(2013ZX09402302-005)
【分类号】：R186
【正文快照】： 无细胞百日咳疫苗抗原纯化方法的改进涉及使用非离子型去垢剂Triton X-100,因此,需对其在该制品中的残留量进行检测。目前已报道的Triton X-100检测方法有化学荧光法[1]、毛细管电泳法、比色法和高效液相色谱法[2]。化学荧光法和毛细管电泳法不适用于含大分子抗原和吸附剂的疫
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前1条
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【相似文献】
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，本文编号：671235
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