赭曲霉毒素模拟抗原表位及phage ELISA的建立

发布时间：2017-08-14 06:32

  本文关键词：赭曲霉毒素模拟抗原表位及phage ELISA的建立

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【摘要】：本研究以驴抗鼠二抗包被微孔板,然后进一步包被抗赭曲霉毒素A(OTA)单克隆抗体,利用噬菌体随机七肽库筛选赭曲霉毒素A模拟抗原表位,并以其替代检测抗原建立了phage ELISA检测OTA方法。实验结果显示筛选获得的OTA7肽模拟氨基酸序列为GMSWMMA;基于模拟表位噬菌体建立的phage ELISA方法检测OTA的IC50值为0.145±0.018 ng/mL,线性范围为0.03~0.50 ng/mL,检测下限为0.020 ng/mL,且与其它四种常见真菌毒素无交叉反应;大米样品OTA加标实验结果显示批Qg加标回收率为96.95%~115.2%,批间加标回收率为107.23%~123.13%;将phage ELISA与商业化的ELISA试剂盒检测结果进行统计学分析,显示无显著性差异。以上结果显示本研究建立的phage ELISA可用于赭曲霉毒素A的快速筛查。
【关键词】：赭曲霉毒素A 噬菌体展示肽库 模拟表位
【学位授予单位】：江西师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R155.5
【目录】：

• 缩略语(Abbreviations)3-4
• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 第一章 文章综述8-22
• 1.1 赭曲霉毒素A及其研究进展8-14
• 1.1.1 OTA的理化性质8
• 1.1.2 OTA毒性作用及其机理8-10
• 1.1.3 OTA在谷物中的污染状况10-11
• 1.1.4 OTA的残留限量标准11
• 1.1.5 OTA的常用脱毒方法11-12
• 1.1.6 OTA的分析检测方法12-14
• 1.2 噬菌体展示技术及其在真菌毒素安全检测中的应用14-20
• 1.2.1 噬菌体展示简介及系统的原理14-15
• 1.2.2 噬菌体展示技术的分类15-17
• 1.2.3 噬菌体展示技术在食品中真菌毒素的研究运用17-20
• 1.3 主要研究内容、目的和意义20-22
• 1.3.1 本研究的目的和主要研究内容20-21
• 1.3.2 本研究的意义21-22
• 第二章 赭曲霉毒素A模拟表位的淘选22-29
• 2.1 实验试剂与仪器22-23
• 2.1.1 试验试剂22
• 2.1.2 试验所需溶液和培养基22-23
• 2.1.3 试验仪器23
• 2.2 实验方法23-25
• 2.2.1 OTA抗原模拟的生物淘选23-24
• 2.2.2 竞争ELISA筛选OTA抗原模拟表位24-25
• 2.2.3 阳性克隆的测序25
• 2.3 实验结果25-27
• 2.3.1 噬菌体的生物淘选的产率25-26
• 2.3.2 OTA抗原模拟表位的鉴定26-27
• 2.3.3 测序结果27
• 2.4 小结与讨论27-29
• 第三章 Phage ELISA方法的建立29-39
• 3.1 实验试剂和仪器29
• 3.1.1 试验试剂29
• 3.1.2 试验所需溶液29
• 3.1.3 试验仪器29
• 3.2 实验方法29-31
• 3.2.1 棋盘法确定抗体包被浓度和噬菌体投入量29-30
• 3.2.2 phage ELISA体系的优化30
• 3.2.3 绘制phage ELISA竞争抑制曲线30-31
• 3.2.4 Phage ELISA性能评价31
• 3.3 实验结果31-38
• 3.3.1 抗体包被浓度和噬菌体投入量的确定31-32
• 3.3.2 ELISA条件优化32-35
• 3.3.3 直接竞争ELISA标准抑制曲线35
• 3.3.4 Phage ELISA方法性能评价35-38
• 3.4 小结与讨论38-39
• 3.4.1 确定phage ELISA的工作条件38
• 3.4.2 成功绘制标准曲线38
• 3.4.3 建立了phage ELISA检测OTA38-39
• 结论与展望39-40
• 参考文献40-46
• 致谢46-47
• 在读期间公开发表论文（著）及科研情况47

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 郭延奎,牛钟相,孙蕙兰;赭曲霉毒素A中毒鸡肝脏超微结构的观察[J];华南农业大学学报;1992年S1期

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本文编号：671256