毛细管电泳免疫分析法检测诺氟沙星兽药残留

发布时间：2017-08-21 11:42

  本文关键词：毛细管电泳免疫分析法检测诺氟沙星兽药残留

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【摘要】：农兽药残留是影响食品安全的主要因素之一,建立快速有效的检测分析方法对食品品质监管具有十分重要的意义。诺氟沙星是一类人畜共用的合成抗生素,属于第三代氟喹诺酮类药物,临床上广泛用于治疗消化系统紊乱和泌尿生殖感染等症状。如果长期食用诺氟沙星残留过量的食品,通过食物链的蓄积作用,不仅会紊乱人体内分泌系统,甚至还会造成体内细菌耐药性增强,影响药物的治疗效果。毛细管电泳免疫分析技术是近年发展起来的一种新型分析技术,它将电泳法的高分离效率和免疫法的高灵敏度结合起来。由于具有高通量、样品处理简单、耗样量少等突出优点,此法广泛应用于医药、食品和化工等分析应用领域。 本研究将毛细管电泳免疫法应用于诺氟沙星检测,建立了诺氟沙星毛细管电泳免疫分析联用激光诱导荧光检测器的检测方法。本方法基于荧光标记诺氟沙星和诺氟沙星标准品竞争结合少量氟喹诺酮类多克隆抗体,通过检测器检测,产生游离的诺氟沙星和抗原抗体免疫复合物两个峰,峰面积会随着诺氟沙星标准品的浓度变化而相应改变,因而能对诺氟沙星定性定量分析。实验中合成出荧光标记物,同时优化了影响毛细管电泳分离效果的各项因素,如免疫反应孵育时间、电泳缓冲液的浓度与pH值、电泳分离电压与进样量等。 结果表明,在25kV电压下,抗原抗体孵育5min后0.5psi压力下进样5s,电泳缓冲液组成为pH8.030mM Na2B4O7-10mM NaH2PO4,5min内即可完成分离,各峰峰形好,分离度较高。新建立的分析方法在0.08～50ng/mL范围内线性良好,最低检出限为0005ng/mL。将1ng/mL的诺氟沙星标准品进行毛细管电泳免疫分析,一天之内重复进样9次,连续5天,测得免疫复合物的迁移时间日内精密度为0.17%,日间精密度为0.23%。将所建立的分析方法应用于鸡肉、猪肉、鱼肉和牛奶的检测,经提取分析后测得回收率在69.7%-92.4%之间,相对标准偏差小于6.5%,诺氟沙星在实际样品中的最低检出限为0.25μg/kg,表明新建立的方法能对食品中残留的诺氟沙星准确定性定量。
【关键词】：诺氟沙星 毛细管电泳 竞争性免疫 激光诱导荧光检测器
【学位授予单位】：天津科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：S859.84;R155.5
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 1 前言8-23
• 1.1 食品安全检测8-9
• 1.1.1 食品安全现状8
• 1.1.2 食品安全检测技术8-9
• 1.2 毛细管电泳技术9-14
• 1.2.1 毛细管电泳基本原理9-11
• 1.2.2 毛细管电泳仪基本结构11-12
• 1.2.3 毛细管电泳技术在兽药残留中的应用12-14
• 1.3 毛细管电泳免疫分析检测技术14-18
• 1.3.1 毛细管电泳免疫分析技术简介14-17
• 1.3.2 毛细管电泳免疫分析技术应用17-18
• 1.4 诺氟沙星18-21
• 1.4.1 诺氟沙星理化性质18
• 1.4.2 诺氟沙星作用机理18-19
• 1.4.3 诺氟沙星代谢动力学19
• 1.4.4 诺氟沙星残留的危害19
• 1.4.5 诺氟沙星检测研究进展19-21
• 1.5 本论文研究目的和意义21-22
• 1.6 本论文研究内容22-23
• 2 材料与方法23-30
• 2.1 实验材料23-26
• 2.1.1 主要材料与试剂23-24
• 2.1.2 主要仪器设备24-25
• 2.1.3 溶液配制25
• 2.1.4 三乙胺精制25
• 2.1.5 乙二胺精制25-26
• 2.2 实验方法26-28
• 2.2.1 抗体纯化与浓度测定26
• 2.2.2 荧光标记诺氟沙星合成与纯化26-27
• 2.2.3 荧光标记诺氟沙星表征27
• 2.2.4 实验条件27
• 2.2.5 标准曲线绘制27-28
• 2.2.6 样品预处理28
• 2.3 方法性能评价指标28-30
• 2.3.1 毛细管电泳分离效率28
• 2.3.2 毛细管电泳免疫分析方法准确度28-29
• 2.3.3 毛细管电泳免疫分析方法精密度29-30
• 3 结果与讨论30-57
• 3.1 荧光标记诺氟沙星合成30-34
• 3.1.1 制备EDF-NOR荧光标记物30-33
• 3.1.2 制备FITC-NOR荧光标记物33-34
• 3.2 荧光标记物的纯化与筛选34-39
• 3.2.1 质谱法检测36-37
• 3.2.2 毛细管电泳免疫分析法检测37-39
• 3.3 毛细管电泳分离条件优化39-48
• 3.3.1 抗体蛋白吸附抑制39-41
• 3.3.2 毛细管柱尺寸选择41
• 3.3.3 荧光标记物与抗体工作浓度41-42
• 3.3.4 免疫复合物形成时间42-43
• 3.3.5 免疫复合物形成温度43-44
• 3.3.6 毛细管电泳缓冲液种类与pH44-46
• 3.3.7 毛细管电泳缓冲液浓度46
• 3.3.8 毛细管电泳分离电压与分离柱温46-48
• 3.3.9 毛细管电泳进样稀释液与进样条件48
• 3.4 标准曲线建立48-49
• 3.5 毛细管电泳免疫分析交叉反应率49-50
• 3.6 样品测定50-55
• 3.7 毛细管电泳免疫分析法与ELISA比较55-57
• 4 结论57-58
• 5 展望58-59
• 6 参考文献59-68
• 7 攻读硕士学位期间发表论文情况68-69
• 8 致谢69

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：712717