食品中镉离子胶体金免疫层析快速检测方法的建立及应用

发布时间：2017-09-16 17:02

  本文关键词：食品中镉离子胶体金免疫层析快速检测方法的建立及应用

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【摘要】：目的:建立更加灵敏、特异的食品镉离子胶体金免疫层析快速检测方法。方法:用1-(4-异硫氰苄基)乙烯基二胺-N,N,N’,N’-四乙酸(1-(4-isothiocyanobenzyl)ethylenediamine-N,N,N’,N’-tetraacetic acid,iEDTA)鳌合镉离子合成Cd~(2+)-iEDTA半抗原,异硫氰酯法制备免疫原Cd~(2+)-iEDTA-牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)和包被原Cd~(2+)-iEDTA-鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA),电感耦合等离子体发射光谱法和聚丙烯酰胺凝胶法进行鉴定;用Cd~(2+)-iEDTA-BSA免疫Balb/C小鼠,细胞融合技术筛选Cd~(2+)-EDTA单克隆抗体(mAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备Cd~(2+)-EDTA mAb;应用Cd~(2+)-EDTA mAb建立Cd~(2+)残留胶体金免疫层析快速检测方法 (Cd~(2+)-Strip),并测定其性能。结果:免疫原偶联成功,Cd~(2+)-iEDTA-BSA中BSA与Cd~(2+)的含量分别为7.1 mg/mL和191.7μg/mL;筛选出1A3C11、2B7D8、2E10G9、4F3E7共4株杂交瘤细胞,经9次传代分泌抗体稳定,亲和力最高的2E10G9株亲和常数(Ka)为7.58×10~8 L/mol,对Cd~(2+)-iEDTA的半数抑制浓度为16.3μg/L,与Hg~(2+)-EDTA的交叉反应(cross-reaction,CR)率为18.6%,与其他重金属离子无CR;Cd~(2+)-Strip的检测时间为10 min,检出限为5μg/L,其检测结果与竞争ELISA试剂盒(Cd~(2+)ELISA-Kit)、电感耦合等离子体发射光谱法符合率为100%。结论:制备出了亲和力高、特异性强的Cd~(2+)mAb,建立了灵敏、特异、快速、简便的食品镉离子胶体金免疫层析快速检测方法。
【作者单位】： 河南科技学院动物科技学院;河南科技学院新科学院;
【关键词】： 镉离子 免疫原 单克隆抗体 胶体金免疫层析 快速检测
【基金】：“十二五”国家科技支撑计划项目(2011BAK10B01;2014BAD13B05)
【分类号】：R155.5
【正文快照】： 重金属污染残留给生态环境、食品安全和人类健康带来了严重危害,2012年发生在广西的龙江河镉污染事件[1]和2013年发生在湖南的大米镉超标事件[2],再次引发政府和社会对镉污染的广泛关注。镉离子(Cd2+)对人体具有肾脏[3]、肝脏[4]、心血管[5]、神经[6]、致癌[7]等多种毒性作用[

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本文编号：864288