铅暴露对大鼠铜相关蛋白影响的实验研究

发布时间：2017-09-18 15:12

  本文关键词：铅暴露对大鼠铜相关蛋白影响的实验研究

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【摘要】：目的本研究通过建立铅染毒大鼠时间-效应模型，探讨铅暴露对铜稳态相关指标包括铜的分布（血清铜、组织铜、血清中未结合铜含量）；铜蛋白酶（单胺氧化酶MAO-B含量、铜蓝蛋白CP活性、Cu/ZnSOD活性）、铜伴侣蛋白（CCS、COX17和ATX1的含量）在铅暴露致神经损伤中的变化，为铅神经损伤的标志物的探讨提供依据。 方法健康雄性SD大鼠64只，体重180～220g，随机分为对照组和铅染毒组，对照大鼠自由含有0.05%醋酸钠的饮水，铅染毒组大鼠饮用含有0.05%醋酸铅的饮水。在染毒后第2、4、6、8周分别处死对照组和铅染毒组大鼠各8只，用于相应的实验。每日观察大鼠精神状态、活动量、饮食多少等情况。在染毒2、4、6、8周时进行神经功能测试，包括感觉功能测试如甩尾实验、运动功能测试如后肢撑力实验、学习记忆功能测试如水迷宫实验和步态评分。应用ICP-MS检测大鼠血清、脑脊液、骨股、皮质、脉络丛、海马中铅、铜的含量。应用ELISA或试剂盒方法检测大鼠血清、海马中铜相关蛋白超氧化物歧化酶Cu/ZnSOD、铜蓝蛋白CP的活性以及单胺氧化酶MAO-B的含量。应用ELISA方法检测大鼠血清、海马中铜伴侣蛋白CCS、COX17和ATOX1的蛋白表达。应用real-time PCR的方法进行海马中CCS、COX17和ATOX1mRNA表达的变化的检测。计量资料以均数±标准差（x±s）表示， SPSS13.0统计软件进行统计学分析，两组间均数比较用成组t检验，多组间均数比较用单因素方差分析（One Way ANOVA）和两两比较的LSD检验，P0.05说明有统计学意义。 结果1铅暴露不同时间后对大鼠神经行为状况的影响：与对照组比较，铅暴露组第4周开始直至第8周，大鼠甩尾时间随时间推移有明显延长趋势，差异有统计学意义（P0.05）；铅暴露组大鼠后肢展开间距均有增大趋势；铅暴露组大鼠第4周、6周、8周第三天潜伏期分别是其对照组的1.41倍、1.64倍、2.34倍，且随着染毒时间的延长，铅染毒组的潜伏期增加。同时各染毒组穿越平台的次数均减少，差异有统计学意义（P0.05）。2铅染毒大鼠不同组织中铅的蓄积：大鼠铅染毒不同时间后，血清、海马中铅的水平均呈上升趋势，同时，实验组大鼠血清、皮质、海马、脑脊液、脉络丛、骨骼中铅的含量随染毒时间的增加而呈上升趋势。3铅暴露对大鼠不同组织中铜水平的影响：铅暴露不同时间后，大鼠血清和海马中铜的含量均增多，同时，铅染毒组大鼠血清、海马中铜的水平随铅暴露时间的增长而呈上升趋势。4铅暴露对大鼠海马和血清中铜蛋白酶的影响：铅暴露组大鼠海马中MAO-B含量在染毒后第2周增加，但在染毒第4、6和8周后，MAO-B含量比对照组分别降低了4.69%、31.73%和40.09%(P0.05)；同样，CP活性也分别降低了52.24%、55.13%和70.83%。 Cu/Zn-SOD活性分别降低了16.64%、21.22%和35.79%，差异有统计学意义(P0.05)。而大鼠染铅2和4周后，血清中MAO-B含量高于对照组，，从6周到8周又逐渐减少；而铅暴露组大鼠血清中CP、Cu/Zn-SOD的活力降低，并随着染毒时间的延长而下降(P0.05)。5铅暴露对大鼠海马和血清中铜伴侣蛋白的影响：铅暴露2周后，大鼠海马中CCS含量开始下降，并一直持续到染毒结束。而铅暴露组海马COX17、ATOX1含量均高于对照组，在铅染毒8周后，大鼠海马中COX17、ATOX1含量分别增加了9.21%和44.59%(P0.05)。但是，铅暴露2和4周后，大鼠血清中CCS、COX17含量增加，之后又下降，与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)；铅暴露2、4、6、8周后，大鼠血清中ATOX1含量分别是对照组的1.2倍、1.44倍、1.56倍和1.62倍，差异有统计学意义(P0.05)。6铅暴露对海马中铜伴侣蛋白mRNA表达的影响：与对照组比较，铅暴露组海马中CCS、COX17和ATOX1的mRNA的表达均上升，如铅染毒组第6周的CCS、COX17、ATOX1的mRNA的表达分别是对照组的2.07倍、1.91倍、1.98倍，铅染毒组第8周的CCS、COX17、ATOX1的mRNA的表达分别是对照组的1.95倍、2.33倍、1.69倍，差异有统计学意义(P0.05)。 结论铅暴露可导致铜相关蛋白的变化，进而导致铜稳态失调，这可能参与了铅导致的神经损伤。
【关键词】：铅暴露 铜 铜相关蛋白 神经毒性 海马 血清 CCS
【学位授予单位】：河北联合大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R114
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩略表10-11
• 引言11-13
• 第1章 铅暴露对大鼠铜相关蛋白影响的实验研究13-39
• 1.1 材料与方法13-23
• 1.1.1 主要仪器和试剂13-14
• 1.1.2 实验动物分组与染毒方法14
• 1.1.3 实验方法14-23
• 1.2 结果23-30
• 1.2.1 大鼠慢性铅中毒症状、体征观察23-24
• 1.2.2 铅暴露对大鼠神经功能影响24-26
• 1.2.3 大鼠铅暴露后血清、海马、皮质、脑脊液、脉络丛、骨骼样品中铅和铜水平的变化情况26-27
• 1.2.4 铅暴露对大鼠血清和海马中铜结合蛋白的影响27-28
• 1.2.5 铅暴露对大鼠血清和海马中铜伴侣蛋白的影响28-29
• 1.2.6 铅暴露对大鼠海马中铜伴侣蛋白 mRNA 表达的影响29-30
• 1.3 讨论30-35
• 1.3.1 铅暴露对大鼠神经行为的改变30-31
• 1.3.2 铅暴露后不同组织和器官中铅的变化31-32
• 1.3.3 铅暴露对不同组织中铜水平的影响32-33
• 1.3.4 铅暴露对大鼠铜结合蛋白的影响33
• 1.3.5 铅暴露对大鼠铜伴侣蛋白的影响33-34
• 1.3.6 铅暴露对大鼠海马中铜伴侣蛋白 mRNA 表达的影响34-35
• 1.4 结论35
• 参考文献35-39
• 第2章 综述39-47
• 2.1 铅暴露致中枢神经损伤表现39-40
• 2.2 铅的中枢神经毒性机制研究40-43
• 2.2.1 铅对大脑屏障的损伤40
• 2.2.2 铅对中枢神经细胞凋亡的影响40-41
• 2.2.3 铅报道对中枢神经系统氧化损伤的影响41
• 2.2.4 铅与其他金属41-42
• 2.2.5 铅引起神经递质系统的改变42-43
• 参考文献43-47
• 致谢47-48
• 导师简介48-49
• 作者简介及在学成果49-50
• 学位论文数据集50

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：876255