七种双酚类化合物雌激素活性评价及其在食品中检测方法的建立和应用

发布时间：2017-09-19 17:08

  本文关键词：七种双酚类化合物雌激素活性评价及其在食品中检测方法的建立和应用

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【摘要】：双酚S（Bisphenol S，BPS）、双酚F（Bisphenol F，BPF）、双酚A（Bisphenol A，BPA）、双酚B（Bisphenol B，BPB）、双酚AF（Bisphenol AF，BPAF）、四氯双酚A（Tetrachlorobisphenol A，TCBPA）和四溴双酚A（Tetrabromobisphenol A，TBBPA）是7种常见的双酚类化合物，广泛应用于工业生产中。同时这7种化合物也是备受关注的环境内分泌干扰物和污染物。 本研究针对这7种化合物开展了一系列的工作，其中主要内容有：1.比较研究了7中双酚类化合物的雌激素效应，包括利用WST-8新型四唑盐细胞增殖实验，考察了这7种化合物对人乳腺癌细胞T47D和MCF-7的增殖效应，通过实时荧光定量PCR检测了这7种化合物对雌激素受体α下游基因组织蛋白酶D（CTSD）、乳腺癌雌激素调控蛋白1（GREB1）和三叶因子1（TFF1）表达的调控作用，考察了BPAF对ERK的激活作用。2.利用固相萃取结合LC-MS/MS技术建立了谷物类食品中BPS、BPF、BPA、BPB和BPAF的检测方法。3.利用固相萃取结合LC-MS/MS技术建立了酒水饮料中这7种双酚类化合物的检测方法。4.利用所建立的检测方法对我国部分省市总膳食样品中谷物类、豆类、薯类和酒水饮料类中双酚类化合物进行暴露评估。主要结果如下： 1.在所选浓度范围内，除了TBBPA，其他6种双酚类化合物均能显著刺激T47D和MCF-7细胞的增殖，并且呈现出明显的剂量效应。通过S曲线拟合，计算得出这6种化合物的半数效应浓度，并得出其雌激素活性大小为：BPAFBPBBPABPFBPSTCBPATBBPA；在所选浓度范围内，7种双酚类化合物均能显著诱导雌激素受体α下游基因的表达；BPAF在100nmol/L浓度下即能快速激活MAPKs信号通路中ERK的磷酸化水平，通过非基因组途径发挥其内分泌干扰效应。 2.建立了谷物类食品中五种双酚类化合物的检测方法：样品经乙腈超声提取两次后，大米、面粉经HLB柱富集净化，玉米面经HLB串联Sep-Pak NH2柱富集净化，最后用高效液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）检测目标化合物。5种目标化合物在3种基质中高中低加标水平回收率分别为62.2%-117.4%、61.2%-121.6%和60.8%-112.3%，相对标准偏差小于20%，定量限在0.01-0.25μg/kg之间。应用所建方法，对北京市售的12份谷物类食品进行了检测，结果发现BPS、BPA和BPAF检出率较高，其中BPS和BPA达到100%。 3.建立了酒水饮料中7种双酚类化合物的检测方法：样品上样前用甲酸将PH调至3-5，果汁、可乐直接经Plexa柱富集净化、白酒用超纯水稀释一倍后经Plexa柱富集净化，最后用LC-MS/MS方法检测目标化合物。7种目标化合物在果汁、可乐和白酒中3个加标水平回收率分别为81.1%-111.1%、59.4%-101.1%、79.2%-102.9%，相对标准偏差小于11%，定量限在0.0015-0.1μg/L之间。将该方法应用于北京市采集的样品，，检测发现BPA检出率高达88%，而其他几种物质的检出率则相对较低。 4.利用上述所建方法，对采集自我国河北、上海、福建和广西的101份膳食样品（谷物类、豆类、薯类、水及饮料、酒类）进行检测，结果发现BPA和BPS检出率较高，而BPB、TCBPA和TBBPA均未检出。
【关键词】：双酚类化合物 雌激素活性 液相色谱串联质谱 谷物 总膳食研究
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R155.5
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-7
• 中英文缩写对照表7-12
• 第1章 引言12-20
• 1.1 前言12-13
• 1.3 双酚类化合物的毒理学效应13-14
• 1.4 双酚类化合物在环境基质中的暴露水平14-16
• 1.4.1 双酚类化合物在室内灰尘中的暴露水平15
• 1.4.2 双酚类化合物在土壤和沉积物中的暴露水平15
• 1.4.3 双酚类化合物在水中的暴露水平15-16
• 1.5 双酚类化合物在食品中的暴露水平16
• 1.6 食品基质中双酚类化合物的分析方法16-17
• 1.7 立题背景与研究内容17-20
• 1.7.1 选题依据17-18
• 1.7.2 研究内容18-20
• 第2章 7 种双酚类化合物雌激素活性的评价20-37
• 2.1 主要仪器、试剂及材料20-21
• 2.2 细胞培养21
• 2.3 细胞增殖实验21-22
• 2.4 细胞相关基因的表达22-25
• 2.4.1 细胞总 mRNA 的提取22-23
• 2.4.2 cDNA 模版的制备23
• 2.4.3 荧光定量 PCR23-25
• 2.5 Western blot 实验25
• 2.6 统计学处理25-26
• 2.7 实验结果26-34
• 2.7.1 BPs 对乳腺癌细胞增殖影响26-28
• 2.7.2 7 种双酚类化合物和雌二醇半数效应浓度28-29
• 2.7.3 BPs 对雌激素受体α下游基因表达水平的影响29-33
• 2.7.4 Western blot 实验结果33-34
• 2.8 讨论34-36
• 2.9 本章小结36-37
• 第3章 谷物类食品中 5 种双酚类物质检测方法的建立37-47
• 3.1 实验材料与方法37-40
• 3.1.1 仪器与试剂37-38
• 3.1.2 标准溶液的配制38
• 3.1.3 样品前处理38
• 3.1.4 色谱质谱条件38-39
• 3.1.5 质量控制39-40
• 3.1.6 方法学40
• 3.2 结果与讨论40-45
• 3.2.1 前处理条件的优化40-43
• 3.2.2 方法学确证43-45
• 3.3 实际样品的测定及分析45
• 3.4 本章小结45-47
• 第4章 酒水及饮料中 7 种双酚类物质检测方法的建立47-55
• 4.1 实验材料与方法47-49
• 4.1.1 实验试剂与仪器47
• 4.1.2 样品前处理47-48
• 4.1.3 色谱质谱条件48
• 4.1.4 标准溶液的配制48
• 4.1.5 质量控制48
• 4.1.6 方法学确证48-49
• 4.2 结果与讨论49-53
• 4.2.1 前处理条件的优化49-52
• 4.2.2 方法学确证52-53
• 4.3 实际样品的测定及分析53-54
• 4.4 本章小结54-55
• 第5章 双酚类化合物检测方法在中国部分省市膳食暴露评估中的应用55-64
• 5.1 实验方法55-58
• 5.1.1 调查地区选择55-56
• 5.1.2 总膳食聚类56
• 5.1.3 样品采集及处理56
• 5.1.4 样品分析56-57
• 5.1.5 质量控制57-58
• 5.1.6 摄入量评估方法58
• 5.1.7 数据处理58
• 5.2 结果与讨论58-62
• 5.2.1 膳食样品中 BPs 检测状况58-60
• 5.2.2 BPs 在膳食样品中的分布60-61
• 5.2.3 我国居民双酚类化合物摄入量水平61-62
• 5.3 本章小结62-64
• 第6章 结论与展望64-66
• 6.1 结论64
• 6.2 展望64-66
• 致谢66-68
• 参考文献68-73
• 硕士期间研究成果73

【参考文献】

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1 杨蕴嘉;牛宇敏;杨奕;张晶;邵兵;;在线固相萃取-液相色谱串联质谱法测定饮用水中的双酚A和壬基酚[J];卫生研究;2013年01期

本文编号：882857