人类H19基因差异甲基化区域用于精斑鉴定的研究

发布时间：2017-10-26 23:14

  本文关键词：人类H19基因差异甲基化区域用于精斑鉴定的研究

  更多相关文章： 精子鉴定 差异甲基化 H19 MSRE-qPCR 男性不育

【摘要】：目的：本课题通过调查父源印记基因H19上游区域在人体血液、正常精子、少弱精子症患者精子中的甲基化状态，建立利用定量PCR对精斑及疑有精子的混和斑进行鉴定的方法，并初步讨论其在法医学、临床男性不育中的意义。 方法：1.应用甲基化敏感性限制性内切酶-qPCR(MSRE-qPCR)法，对32例血液样本、32例正常精液样本及17例少弱精子症患者精液样本中H19基因上游区域甲基化水平进行分析。 2.对32例血液样本、32例正常精液样H19基因上游区域甲基化水平结果进行统计学分析，并确定判定精子的判别值。 3.应用MSRE-qPCR法，对混和了一定比例全血基因组DNA的精子DNA样本中H19基因上游区域甲基化状态进行分析，模拟混和斑中精子含量的鉴定。 结果：精子父源印记基因H19上游区域甲基化水平明显高于血液，32例血液样本中父源印记基因H19上游区域甲基化水平为55.27±8.36%，32例精子样本中父源印记基因H19上游区域甲基化水平为101.94±11.66%，17例少弱精子症患者精液样本中父源印记基因H19上游区域甲基化水平为80.70±22.30%，以97.66-106.21%做为采用MSRE-qPCR方法分析父源印记基因H19上游区域甲基化水平进行精液斑判定的判别区间。 结论：精子中父源印记基因H19上游区域具有高甲基化状态，可作为鉴定正常精子的特异性标记，同时本文确定了父源印记基因H19上游区域甲基化水平，对于健康人群，52.25%-58.28%为纯血液斑判别区间，97.66-106.21%为纯精液斑判别区间，66.63-90.28%为血液与精液混合斑判别区间。异常精子因其甲基化水平变异大，，因而影响未知样品的正确判别，但若甲基化水平超过97.66%时仍可判定为纯精液斑。
【关键词】：精子鉴定 差异甲基化 H19 MSRE-qPCR 男性不育
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：D919
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 第一部分 前言8-11
• 第二部分 实验材料与方法11-26
• 1 材料11-15
• 2 方法15-26
• 第三部分 结果26-35
• 1 非人组织中引物对 A、B、C 扩增可能性分析26
• 2 血液及精子 DNA 中 H19 基因上游区域甲基化状态26-28
• 3 甲基化水平检测结果及精斑点的判别28-33
• 4 应用 qPCR 技术结合 H19 基因组织特异性甲基化模拟疑有精子的混和斑的鉴定33-35
• 第四部分 分析与讨论35-42
• 1. 印记基因 H19 甲基化状态35-36
• 2. 基因组 DNA 甲基化状态检测方法36-37
• 3. MSRE-qPCR 法检测父源印记基因 H19 上游区域甲基化状态在法医学精子鉴中的意义37-40
• 4. MSRE-qPCR 法检测父源印记基因 H19 上游区域甲基化状态在临床男性不育与辅助生殖技术中的意义40-42
• 第五部分 结论42-43
• 参考文献43-48
• 综述48-62
• 参考文献57-62
• 附录62-69
• 攻读学位期间发表论文情况69-70
• 致谢70-72
• 个人简历72

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本文编号：1100882