转录后调控SOD1增加肿瘤细胞放射效应影响的研究

发布时间：2018-04-12 00:23

  本文选题：SOD1 + 转录后调控　； 参考：《苏州大学》2014年博士论文

【摘要】：目的：目前克服肿瘤细胞放射抗拒性策略较多,但效果欠佳。研究发现SOD1高表达是肿瘤对放化疗抵抗的重要机制之一，但SOD1高表达的机制不明。基因表达的精细调控多与3’UTR的转录后调控有关，但关于肿瘤SOD1的转录后调控报道较少，因此本课题拟探讨肿瘤SOD1转录后调控机制及其对肿瘤反射效应的影响，为以SOD1为靶标的放疗增敏策略提供理论基础。 方法：本课题主要以卵巢癌细胞系A2780和胰腺癌PANC1为模型，，（1）构建SOD-3’UTR的荧光素酶报告载体，观察SOD1、SOD2-3’UTR在肿瘤细胞对荧光素酶活性的影响，以及在过氧化氢和X射线作用下的变化；并应用RT-PCR和蛋白印迹法验证肿瘤细胞在过氧化氢作用下SOD1mRNA和蛋白表达水平的变化（2）比较SOD1-3’UTR在两种肿瘤细胞中对荧光素酶活性的影响，并应用RT-PCR法检测萤火素酶mRNA的水平；并进一步应用蛋白印迹法观察外源SOD-3’UTR对内源性SOD蛋白表达的影响。构建不同的SOD1-3’UTR荧光素酶报告载体，包括含有不同AREs的、miRNA（miR-224、-377、-621）结合位点缺失的、单个或多个AREs联合缺失的3’UTR载体，或应用miRNA的拟似物或抑制剂等观察RNA元件对3-‘UTR所介导的荧光素酶性的影响，或SOD1蛋白表达的变化。构建SOD1-Promoter-SOD1-3’UTR荧光素酶报告载体，进一步对该载体进行AREs缺失突变，检测X射线处理后荧光素酶活性的变化。（3）RNA干扰技术下调AUF1或外源真核表达上调AUF1，观察其对SOD1蛋白表达的变化；以及SOD1-3’UTR所介导的荧光素酶活性的变化；并观察AUF1下调对肿瘤细胞ROS水平的影响；进一步应用RNA免疫共沉淀检测AUF1与SOD1-3’UTR的直接作用；免疫组化法检测胰腺癌标本中AUF1和SOD1蛋白的表达。 结果：（1）SOD1、SOD2-3’UTR正义载体与反义载体相比，荧光素酶活性增加近20倍；过氧化氢100μM明显增加了A2780细胞内SOD1、SOD2-3’UTR所介导的荧光素酶活性；10Gy射线明显增加了A2780细胞内SOD1-3’UTR所介导的荧光素酶活性;过氧化氢100μM增加了A2780细胞SOD1mRNA和蛋白表达水平；（2）在A2780和PANC1细胞内SOD1-3’UTR正义载体相比反义、空载体的荧光素酶活性明显增加；SOD1-3’UTR增加了A2780细胞萤火素酶mRNA的水平；外源SOD-3’UTR降低了A2780细胞内源性SOD蛋白的表达，并且外源SOD1-3’UTR能降低内源性SOD2蛋白的表达；逐步的对SOD1-3’UTR作片段的截断后结果显示荧光素酶活性也逐渐降低；miR-224, miR-377结合位点的缺失导致荧光素酶活性显著下降，而miR-621结合位点的缺失未见明显变化；miR-377或miR-621的拟似物或抑制剂并没有显著影响内源性SOD1的表达，也没有影响SOD1-3’UTR所介导的荧光素酶活性；任一个ARE的缺失均能降低荧光素酶活性，以ARE6的作用最强；但当载体仅包含2个或4个ARE本身的序列时荧光素酶活性几乎测不出。ARE6的缺失逆转了X射线诱导的SOD1-Promoter-SOD1-3’UTR所介导的荧光素酶活性的增加。（3）AUF1的下调明显降低了SOD1蛋白的表达水平，而HuR的下调对SOD1蛋白表达的影响不大，并与荧光素酶活性的结果一致；AUF1的高表达增加了这两种细胞系内的SOD1-3’UTR介导的荧光素酶活性；RT-PCR法仅能从AUF1沉淀物中检测到SOD1-3’UTR的表达；93例胰腺癌组织标本检测的结果显示AUF1和SOD1的蛋白表达明显相关。 结论：（1）SOD1-3’UTR与肿瘤细胞基础和应激状态下SOD1的表达相关（2）SOD1-3’UTR能增加肿瘤细胞SOD1mRNA的稳定性，并与ARE特别是ARE6相关，与所检测的miRNA结合位点相关的可能性不大。（3）AUF1通过与SOD1-3’UTR结合影响肿瘤SOD1表达是SOD1转录后调控的机制之一，并能影响肿瘤细胞基础的和放射诱导的ROS水平。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R730.55

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 戴冰冰,卢健,王家敏,梅文瀚,王楚,钱关祥;PI3KγmRNA 3′非翻译区可能存在基因表达负调控区[J];中国生物化学与分子生物学报;2003年05期

2 夏小雨;陈学进;;哺乳动物精子发生中转录调控机制的特点[J];医学分子生物学杂志;2008年01期

3 焦义祖;;细胞因子mRNA转录后调控的研究进展[J];生命科学;2010年05期

4 马中良;金由辛;;微RNA与肺癌[J];生命的化学;2010年04期

5 杜光伟,周严,袁建刚,强伯勤;RRM RNA结合蛋白的结构与功能[J];生物化学与生物物理进展;1999年04期

6 苗翠翠;程汝滨;宫倩红;于文功;;细菌调节蛋白Hfq研究进展[J];现代生物医学进展;2009年09期

7 陈陵;熊晓峰;高军;邹利全;张方征;王洪斌;;负载hTERT调控相关miR-138慢病毒的包装及鉴定[J];现代医药卫生;2011年02期

8 霍丽蓉;王晓民;;多种功能的Poly(C)-结合蛋白[J];中国生物化学与分子生物学报;2011年03期

9 王晓凤;辛秀娟;;基因表达与mRNA结构的关系[J];中国比较医学杂志;2010年06期

10 金艳阳;李刚;刘四明;佟明;;miRNA在非依赖性前列腺癌的作用机制研究进展[J];山东医药;2011年04期

相关会议论文 前10条

1 邵毅;;乙烯生物合成途径ACC合成酶转录后调控机理研究进展[A];提高全民科学素质、建设创新型国家——2006中国科协年会论文集[C];2006年

2 杨云青;;渗透浓度敏感的microRNAs对渗透调控转录因子OREBP//TonEBP/NFAT5的转录后调控[A];中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集[C];2010年

3 管文静;吴茂森;陈华民;何晨阳;;病原细菌第二信使c-di-GMP核糖开关的鉴别[A];中国植物病理学会2009年学术年会论文集[C];2009年

4 杨传平;王玉成;高彩球;张大伟;;二色补血草GRP基因的抗逆分子机制研究[A];东北三省及内蒙古地区遗传学研究进展学术研讨会论文汇编[C];2009年

5 郭艳;刘佳;尚超;孙开来;富伟能;;喉癌中MicroRNA-24(miR-24)转录后下调炎症因子S100A8的表达并促进Hep2细胞侵袭[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编（2004-2008）[C];2008年

6 朱燕;仇灏;刘可人;吴士良;;人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2):RNA干扰载体的构建及其功能的初步研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集[C];2006年

7 王芸;陶筱川;吕应堂;;水稻MicroRNAs在水稻发育过程中的功能研究[A];湖北省植物生理学会第十五次学术研讨会论文集[C];2007年

8 刘曾荣;;动力学与控制在生物系统中应用的几个例子[A];中国力学学会学术大会'2009论文摘要集[C];2009年

9 朱红倩;刘晓力;张嵩;李荣;杜庆锋;刘志;欧阳凌云;欧阳昭;;siRNA对慢性髓系白血病细胞hnRNPK基因表达的抑制体系建立和功能观察[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

10 毛旭明;周展;冯微宏;汪智彬;李永泉;;天蓝色链霉菌中ECF sigma因子SigT转录后调控机制研究[A];2010年第四届全国微生物遗传学学术研讨会论文摘要集[C];2010年

相关重要报纸文章 前4条

1 记者 赵凤华　通讯员 王怀民;我科学家“看清”PTB蛋白是如何致癌的[N];科技日报;2010年

2 记者 韩晓玲　通讯员 王怀民;武大教授揭示致癌蛋白作用新机制[N];湖北日报;2010年

3 驻鄂记者 钱忠军　通讯员 王怀民;揭示致癌蛋白作用新机制[N];文汇报;2010年

4 记者 胡德荣;动物冬眠蛋白质表达整体变化被揭示[N];健康报;2009年

相关博士学位论文 前10条

1 薛景;转录后调控SOD1增加肿瘤细胞放射效应影响的研究[D];苏州大学;2014年

2 张征;microRNA介导HAb18G/CD147分子转录后调控及其机制[D];第四军医大学;2009年

3 裴原;NFAR1稳定IL-2 mRNA上游调节机制的研究[D];复旦大学;2006年

4 于芳;RNA结合蛋白QKI-5对FoxO1的转录后调控在维甲酸抑制乳腺癌细胞增殖中的功能研究及新基因Apr3参与维甲酸诱导细胞周期阻滞的功能研究[D];第四军医大学;2007年

5 肖斌;幽门螺杆菌非编码小RNA的筛选、鉴定及miRNAs在幽门螺杆菌感染中负向调控炎症反应的作用研究[D];第三军医大学;2009年

6 王林涛;1. p38对COX-2转录后调控的作用与胰岛β细胞功能关系的研究 2. 萤光素酶报告基因分析转录后调控元件方法研究[D];南京医科大学;2008年

7 郭艳;喉癌中S100A8基因调控机制研究[D];中国医科大学;2009年

8 王俊;HuR介导IL-1β增加NSCLC细胞VEGF-C mRNA稳定性的分子机制[D];第三军医大学;2008年

9 傅海燕;RNA结合蛋白QKI在造血系统髓系分化中的表达调控及其功能研究[D];第四军医大学;2009年

10 刘真;幽门螺杆菌感染相关microRNAs的筛选、鉴定及功能研究[D];第三军医大学;2010年

相关硕士学位论文 前10条

1 孙媛媛;HPV16主要衣壳蛋白L1与hnRNP H1的相互作用及其功能[D];厦门大学;2008年

2 洪妍;受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O（PTPRO）基因的表达受MiR-17-92簇调控[D];东北师范大学;2008年

3 庞明利;番茄中miR397靶基因LeLAC~（miR397）的克隆与表达分析[D];山东农业大学;2008年

4 徐小红;拟南芥miR393基因转录、加工及其非生物胁迫中的功能初探[D];浙江大学;2008年

5 朱银城;猪PGM1基因的序列、表达谱及多态性分析[D];华中农业大学;2010年

6 周思;MicroRNA-190对人大肠癌细胞中DPC4基因转录后调控作用的初步研究[D];中南大学;2013年

7 马高祥;RNA结合蛋白Sam68 mRNA在原发性肝癌中的表达[D];浙江大学;2005年

8 包纯;mir-7和mir-153与靶mRNA相互作用的实验研究和理论分析[D];华中师范大学;2012年

9 晋亮;RNA结合蛋白QKI在化疗药物诱导的肿瘤细胞凋亡过程中的作用及其机制研究[D];第四军医大学;2010年

10 李英明;hPER1 bHLH-PAS结构域酵母双杂交系统的构建[D];四川大学;2004年

本文编号：1738352