经转化生长因子-α刺激的骨髓间充质干细胞治疗急性放射性肠损伤的实验研究
发布时间：2018-05-13 22:13
本文选题：SD大鼠 + 细胞培养 ； 参考：《福建医科大学》2013年硕士论文
【摘要】：第一部分：SD大鼠BMSCs的分离、培养、纯化及其生物学特性鉴定的研究 目的：体外分离、培养、纯化及鉴定SD大鼠BMSCs，以获得纯度高、生物学特征稳定的BMSCs，为课题研究奠定基础。 方法： 1运用密度梯度离心法联合细胞贴壁法从雄性SD大鼠股骨及胫骨中分离、培养和纯化BMSCs，并观察细胞形态。 2流式细胞仪检测CD34、CD44和CD90的表达。 3用冯库萨染色法（Von Kossa）染色法、油红O染色鉴定BMSCs向成骨、成脂肪细胞分化潜能。 结果： 1运用密度梯度离心法联合细胞贴壁法分离培养的BMSCs呈克隆式生长，梭形，大小均一。P3代BMSCs纯度达98.5%以上。 2培养的BMSCs经流式细胞仪检测表达CD44、CD90表面抗原，不表达CD34表面抗原。 3培养的BMSCs经成骨、成脂诱导培养后可向成骨细胞及成脂肪细胞分化。 结论：密度梯度离心法联合细胞贴壁法能成功分离培养出SD大鼠BMSCs。且形态均一、增殖能力强、纯度高、生物学特征稳定，可用于本课题对BMSCs的实验研究。 第二部分：TGF-诱导BMSCs向上皮细胞分化的研究 目的：探究经TGF-诱导的BMSCs向上皮细胞的分化能力及最适诱导浓度，为下一步经TGF-刺激的BMSCs对放射性肠道损伤的实验研究奠定基础。 方法：将培养在3板12孔细胞培养皿中的BMSCs每板随机分为四组，A组：空白对照组。B组：加入200ng/ml TGF-。C组：加入250ng/ml TGF-。D组：加入300ng/ml TGF-。用ELISA检测第1、3、7天各组细胞培养液的VEGF浓度，用免疫荧光法检测第1、3、7天BMSCs中CK蛋白。 结果：1、四组培养液中均检测到VEGF，同期下C组浓度最高，P〈0.05。 2、经TGF-刺激的BMSCs在培养7天后能检测CK蛋白，同期下C组阳性率最高，P〈0.05。 结论：1、BMSCs在培养中能分泌VEGF 2、TGF-能促进BMSCs分泌VEGF，在250ng/ml刺激下分泌较多 3、TGF-能诱导BMSCs向上皮细胞分化，且250ng/ml的浓度诱导分化最明显。 第三部分：经TGF-刺激的BMSCs干细胞对急性放射性肠道损伤的实验研究 目的：1、建立急性放射性肠损伤大鼠模型；2、观察大鼠BMSCs及经TGF-刺激的BMSCs对急性放射性肠道损伤的治疗疗效，并初步探讨疗效机制。 方法： 1急性放射性肠损伤大鼠模型的建立： SD大鼠在我院放疗科用直线加速器进行X线照射。总剂量12Gy。 2造模后的180只雌性SD大鼠随机分为3组（各60只），即A组（空白对照组）、B组（BMSCs治疗组）与C组（经TGF-刺激的BMSCs治疗组）。A组于照射后4小时内尾静脉输注1ml的生理盐水；B组于照射后4小时内尾静脉输注1×106/ml的SD大鼠BMSCs悬液1ml；C组于照射后4小时内尾静脉输注1×106/ml的经250ng/mlTGF-刺激的SD大鼠BMSCs悬液1ml。照射后第1天、3天、7天、14天、21天每组随机处死6只大鼠，，留取全血与两份末端回肠标本。光镜下观察肠道组织结构，观察绒毛高度及隐窝深度；用ELISA方法检测血清及回肠组织中瓜氨酸及IL-6、TNF-、VEGF的浓度。 结果： 1SD大鼠急性放射性肠损伤模型建立：成功的建立了SD大鼠急性放射性肠损伤模型。 2BMSCs及经TGF-刺激的BMSCs对急性放射性肠道损伤治疗效果：（1）：与同时期A组相比较，B、C组SD大鼠回肠粘膜上皮细胞坏死和炎性细胞浸润少，绒毛及腺体数量较多；绒毛高度及隐窝深度C㧐B㧐A，P㩳0.05。（2）：与同时期A组相比较，B、C组IL-6、TNF-在第3、7、14天浓度低，P㩳0.05，且C组浓度低于B组，P㩳0.05，第1天、21天无明显差异，P㧐0.05。（3）：与同时期A组相比较，B、C组VEGF、瓜氨酸在第3、7、14天浓度低，P㩳0.05。且C组浓度高于B组，P㩳0.05，第1天、21天无明显差异，P㧐0.05。（4）：组织瓜氨酸及IL-6、TNF-及VEGF浓度均高于同时期血清浓度。 结论： 1用直线加速器在总剂量12Gy下能成功建立急性放射性肠损伤动物模型。 2BMSCs及经TGF-刺激的BMSCs均能促进急性放射肠损伤后肠道结构及功能的修复。 3BMSCs及经TGF-刺激的BMSCs对急性放射性肠道损伤的修复均与抗炎、促增殖有关。 4与单纯BMSCs比较，经TGF-刺激的BMSCs更显著地促进急性放射肠损伤后肠道功能的修复。
[Abstract]:Part one: isolation, culture, purification and biological characterization of BMSCs from SD rats.
Objective: to isolate, culture, purify and identify BMSCs from SD rats in order to obtain BMSCs with high purity and stable biological characteristics.
Method锛
本文编号：1885036
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