脂肪间充质干细胞修复放射性肠损伤的实验研究

发布时间：2018-10-19 14:25

【摘要】：目的：本研究旨在利用脂肪来源的间充质干细胞（Ad-MSC），评价其对放射性肠损伤的修复作用。 方法：本研究采用的实验动物为成年雄性SD大鼠，SPF级，体重400~450g，共152只。首先，选择其中36只大鼠进行放射性肠损伤的剂量效应关系研究。将其平均分为4组，每组9只。分别给予0、8.5、12及15Gy的全腹部X射线照射。照射后14d内，每2d称量大鼠体重，计算占初始体重的百分比；记录受照大鼠的腹泻发生率及便潜血阳性率；HE染色分析受照小肠组织形态的变化；采用One-way ANOVA方法对组间数据进行比较。然后，选择40只大鼠进行了Ad-MSC修复放射性肠上皮损伤的实验研究。将大鼠分为3组：健康对照组（6只）、PBS溶剂对照组（17只）和Ad-MSC治疗组（17只）。全腹照射剂量为15Gy，腹腔移植的Ad-MSC数量为5×106/只。PBS腹腔注射量为：1.5ml/只。在照射后的第10、20及30d，将PBS溶剂对照组及Ad-MSC治疗组的大鼠分批处死，每组3只。获取新鲜的肠组织标本进行上皮完整性的分析，包括：HE染色分析受照肠组织形态，Ki67免疫组化染色分析隐窝细胞增殖，TUNEL检测受照肠组织凋亡细胞，Bmi1免疫组化染色分析隐窝Bmi1阳性肠干细胞数量，实时荧光定量PCR检测受照组织内EGF、KGF、E-Cadherin、Bax和Bcl-2基因的表达。统计分析各组大鼠体重变化及生存率。然后，再次选择40只大鼠，采用同样的分组方法和造模方法进行了Ad-MSC修复损伤血管的实验研究。在照射后的第10、20及30d，将PBS溶剂对照组及Ad-MSC治疗组的大鼠分批处死，每组3只。免疫荧光染色分析受照部位CD31/vWF双阳性血管内皮细胞的数量，Isolectin-B4染色分析受照部位脉管系统的密度，，VE-Cadherin免疫组化染色分析受照部位血管结构的完整性。CD31/CD105/CD34/CD45/CD133/Ki67免疫荧光染色分析受照部位血管的新生机制，实时荧光定量PCR检测受照组织内VEGF、HGF和SDF-1因子的表达量。统计分析各组大鼠的体重及生存率变化。最后选取剩余36只大鼠，进行了Ad-MSC的抗炎作用研究。实验分为3组：健康对照组（6只）、PBS溶剂对照组（15只）和Ad-MSC治疗组（15只）。造模方法同前。在照射后第3.5、7、10、20和30d，将PBS溶剂对照组和Ad-MSC治疗组大鼠分批处死，每组3只。获取大鼠外周血及胸腺组织。流式细胞术分析样本中CD4/CD25/Foxp(3)阳性调节性T细胞的百分比。ELISA方法检测外周血IL-10的含量。获取受损肠组织，Masson染色分析受照肠组织胶原的沉积，MPO免疫组化染色分析炎症细胞在损伤部位的浸润。PBS溶剂对照组及Ad-MSC治疗组数据采用配对t检验来进行比较。 结果：研究发现，放射性肠损伤的损伤程度与辐射剂量具有线性依赖关系。以15Gy剂量引起的病理变化具有典型的放射性肠损伤疾病特征。与PBS溶剂对照组相比，Ad-MSC能够上调损伤部位EGF、KGF和Bcl-2基因的表达，促进隐窝细胞的增殖；通过下调损伤部位Bax基因的表达，抑制上皮细胞的凋亡。从而增加了隐窝内Bmi1阳性肠干细胞的数量。另外，Ad-MSC通过上调损伤部位VEGF、HGF和SDF-1基因的表达动员骨髓中CD31阳性造血干/祖细胞向损伤部位迁移，促进该部位血管的重建。不仅如此，Ad-MSC能够上调外周血及胸腺组织内的CD4/CD25/Foxp(3)炎性调节性T细胞的百分比，提高外周血中IL-10的含量，减轻受照大鼠体内的炎症反应。 结论：Ad-MSC对放射性肠损伤具有修复作用，这是通过促进上皮完整性恢复、加速受损部位血管结构的重建以及减轻宿主体内炎症反应3方面来完成的。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R818

【参考文献】

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1 叶霈智;;放射性肠炎临床治疗现状评述[J];癌症进展;2010年01期

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3 王守安;张胜昌;田国忠;钟震亚;;成人和胎儿回肠器官内微血管构筑[J];解剖科学进展;2010年05期

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5 毕迎惠;韩俊庆;盛巍;李兆沛;胡平平;沈斌;;爱维治对急性放射性肠炎大鼠肠道修复作用的实验研究[J];山东大学学报(医学版);2007年03期

6 翟瑞庆;翟红运;;扶正止泻汤治疗放射性肠炎68例[J];上海中医药杂志;2008年11期

7 胡岳然,吴超权,陈楚平,王耀邦,刘雅洁,李先明,吴冬;盆腔肿瘤放疗中用参苓白术散防治放射性肠炎[J];实用癌症杂志;2004年03期

8 王瑞娟;彭瑞云;高亚兵;常公民;徐新萍;付凯飞;罗庆良;;IL-11保护中子照射后肠上皮损伤的Jak/STAT信号转导机制研究[J];细胞与分子免疫学杂志;2009年01期

9 钟雪云,陈运贤;脐带血造血干细胞移植的伦理问题[J];中国医学伦理学;2000年05期

10 李荣富;孙涛;;放射性肠炎发生机制的研究进展[J];医学综述;2011年02期

本文编号：2281405