苯肾上腺素对放射损伤早期大鼠颌下腺的保护作用及其分子机制研究

发布时间：2018-10-22 06:46

【摘要】：背景：对头颈部恶性肿瘤进行放射治疗的同时，不可避免地引起放射性涎腺损伤，严重影响患者生活质量。由于涎腺对放射线照射极其敏感，且腺体自身修复能力低下，尚无有效的治疗方法。因此，进一步探讨放射性涎腺损伤的机制，寻找有效的治疗方法迫在眉睫。研究报道，苯肾上腺素（phenylephrine, PE）可显著减轻X线照射后早期和晚期大鼠腮腺的损伤，然而其机制尚不明确。研究表明，烟酰胺磷酸核糖转移酶（nicotinamide phosphoribosyltransferase, Nampt）可增强细胞抵御氧化应激的能力，然而Nampt在放射性涎腺损伤中的作用尚缺乏研究，其表达与PE的关系亦缺乏了解。目的：研究Nampt在大鼠涎腺的表达及分布；探讨苯肾上腺素对放射损伤早期大鼠颌下腺的保护作用以及苯肾上腺素对放射损伤早期大鼠颌下腺Nampt表达的影响。第一部分：烟酰胺磷酸核糖转移酶在大鼠涎腺的表达与定位方法：取健康成年Wistar大鼠6只，活体取大鼠腮腺、颌下腺和大舌下腺。应用免疫组织化学法检测正常大鼠涎腺Nampt的分布；应用逆转录聚合酶链法（reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR）和免疫印迹法（Westernblot）检测正常大鼠腮腺、颌下腺和大舌下腺Nampt mRNA和蛋白质的表达。结果：大鼠腮腺、颌下腺和大舌下腺均有Nampt的表达，，Nampt均主要分布于浆液性腺泡细胞的胞浆和胞核，以及闰管和纹状管的胞核中。其表达丰度最高的为腮腺，其次为颌下腺，最少的是大舌下腺。结论：大鼠腮腺、颌下腺和大舌下腺均存在Nampt的mRNA和蛋白质的表达，为深入研究Nampt在涎腺生理及病理状态下的功能意义提供初步实验依据。第二部分：苯肾上腺素对放射损伤早期大鼠颌下腺的保护作用及对Nampt表达的影响方法：健康成年Wistar大鼠18只，随机分为空白对照组、单纯照射组及照射后给药组（腹腔注射苯肾上腺素，5mg/kg，一天两次）。大鼠腹腔麻醉下用直线加速器给予颌下腺区域20Gy X射线照射。照射后7天取颌下腺组织，HE染色检测各组颌下腺形态学变化；免疫组化检测PCNA和Nampt在各组颌下腺的分布；脱氧核糖核苷酸末端转移酶末端标记法（terminal deoxynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP-digoxigenin nick end labeling, TUNEL）法检测各组颌下腺细胞凋亡情况；免疫印迹法检测颌下腺Nampt蛋白质的表达。结果： 1.光镜可见单纯照射组腺泡细胞萎缩明显，核固缩；照射后给药组腺泡细胞较之萎缩明显减轻，与空白组腺泡细胞形态相似。 2.免疫组织化学结果显示：单纯照射组腺泡和导管中PCNA阳性染色细胞较空白对照组增加74.86%（P 0.01），照射后给药组PCNA阳性染色细胞数在腺泡及导管细胞都显著增加，较单纯照射组增加了162.18%（P 0.01）。空白对照组、单纯照射组和照射后药组PCNA阳性染色细胞数（400倍高倍视野下）分别为：17.7±2.27，30.95±3.66和81.15±5.63。空白对照组Nampt主要表达于浆液性腺泡细胞的胞浆及导管细胞的细胞核；单纯照射组Nampt的表达较空白对照组显著减少；照射给药组Nampt的表达较单纯照射组明显增加。 3. TUNEL法显示，单纯照射组颌下腺细胞中可见大量的TUNEL阳性细胞，照射后给药组颌下腺细胞中可见个别的TUNEL阳性细胞，较单纯照射组凋亡细胞数显著减少。TUNEL阳性细胞计数（每个400倍高倍视野下）在空白对照组、单纯照射组和照射后给药组分别为：5.13±1.46，57.8±6.35和9.01±2.46。 4. Western blot结果显示：单纯照射组Nampt蛋白表达较空白对照组降低了44.85%（P＜0.05），照射给药组Nampt蛋白表达较单纯照射组增加了86.63%（P＜0.05）。结论： 1.苯肾上腺素能够能够减轻大鼠放射损伤后颌下腺腺泡细胞萎缩，抑制放射损伤早期大鼠颌下腺腺泡细胞凋亡，促进腺泡及导管细胞增殖。本研究有望为防治头颈部肿瘤放射治疗后涎腺损伤提供新的策略。 2.苯肾上腺素可上调放射损伤早期大鼠颌下腺Nampt的表达，Nampt有望成为临床治疗放射性涎腺损伤的新靶点。
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【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R965;R818.05

【参考文献】