ATM启动自噬在人肿瘤细胞低剂量辐射超敏感性中作用的研究

发布时间：2020-02-09 23:23

【摘要】：目的：探讨A549细胞发生低剂量辐射超敏向低剂量辐射抗拒转变(HRS/IRR)的机制及ATM激酶和自噬在其中的作用。 方法：（1）流式分选计数克隆形成法检测不同剂量照射后人肺腺癌A549细胞株(HRS/IRR+)及人宫颈癌SIHA细胞株(HRS/IRR－)的存活分数，观察HRS/IRR与放射剂量间的关系。（2）酶标仪检测不同剂量照射后两种细胞内活性氧(ROS)水平。（3）Westernblot免疫印迹法检测不同剂量照射后两种细胞中Phospho-ATM(Ser1981)/ATM和自噬相关蛋白MAP1LC3BⅠ/Ⅱ(微管相关蛋白1轻链3BⅠ/Ⅱ)表达水平。（4）激光共聚焦LC3-GFP检测法观察不同剂量照射后两种细胞的自噬发生情况。（5）透射电镜检测两种细胞在接受0.2Gy剂量照射后胞浆中自噬泡形成情况。 结果：（1）A549细胞表现出显著的HRS/IRR现象；而SIHA细胞无。（2）当辐射剂量≤0.2Gy时，A549细胞内ROS水平随着放射剂量的增加而增加，当剂量达到0.3Gy时，细胞内ROS则出现明显的下降，随后ROS随着放射剂量的增加而再度增加；SIHA细胞中ROS水平随放射剂量的增加无显著改变。（3）A549细胞在0.2Gy时，Phospho-ATM(Ser1981)开始表达，随放射剂量增加表达无明显变化；SIHA细胞在起始剂量便存在Phospho-ATM(Ser1981)表达，与放射剂量变化无关。A549细胞在0.2Gy时，MAP1LC3BⅡ开始表达并随放射剂量增加而表达增加；SIHA细胞在起始剂量便存在MAP1LC3BⅡ表达，，随放射剂量增加而表达增加。（4）A549细胞在放射剂量达到0.2Gy时可见自噬发生，后随放射剂量增加自噬逐渐累积；SIHA细胞在起始剂量便存在自噬，并随放射剂量增加而累积。（5）电镜下观察到在0.2Gy时A549细胞仅有极少量自噬泡结构；而同样放射剂量下SIHA细胞中有显著地自噬泡产生。 结论：（1）ATM激酶的活化与自噬启动可能存在关联。（2）ATM激酶的活化与HRS/IRR现象存在相关性。（3）自噬可能参与促成HRS向IRR的转变。
【图文】：

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文实验 结 果 1. 细胞 存 活曲 线 ： A5 4 9 细 胞和 S IH A 细 胞在 接 受0 G y ~ 4G y 之 间剂 量X 射 线照 射后 的存 活分 数应用 线 性 平方 模 型 及 修正 的 诱 导 修复 模 型 [1 3 , 14 ] 来拟 合 各自 的 细胞 存 活 曲线 ：

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文实验 结 果 1. 细胞 存 活曲 线 ： A5 4 9 细 胞和 S IH A 细 胞在 接 受0 G y ~ 4G y 之 间剂 量X 射 线照 射后 的存 活分 数应用 线 性 平方 模 型 及 修正 的 诱 导 修复 模 型 [1 3 , 14 ] 来拟 合 各自 的 细胞 存 活 曲线 ：
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R730.55

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本文编号：2577985