阻断ANGⅡ途径影响人血管内皮细胞TGF-β1分泌机制探讨

发布时间：2020-03-09 08:02

【摘要】：第一部分建立放疗后EA.Hy926细胞因子持续分泌模型目的：建立常规分割照射后,血管内皮细胞持续分泌细胞因子TGF-β1模型。方法：2Gy分割剂量的X线(每天一次,每周五次,总计28Gy)照射指数生长期的人脐静脉融合细胞株EA.Hy926,照射野为30x30cm,源皮距为100cm。设置三个平行样本,在末次照射后1月,2月,3月,4月,5月提取mRNA,以未照射组为对照组,采用RT-PCR方法摸索各基因的最佳实验条件,实时定量qRT-PCR (quantitive Real Time-Polymerase Chain Reaction)方法检测TGF-β1mRNA水平的变化。于末次照射后1月,2月,3月,4月,5月提取细胞总蛋白,采用western bloting法测定TGF-β1蛋白水平的表达情况。结果：经2Gy×14次放疗后1月到5月,人脐静脉血融合细胞株EA.HyY926细胞TGF-β1mRNA,与对照相比,表达均升高(P0.05)。在蛋白水平,与对照组相比,TGF-β1蛋白持续升高(P0.05)。结论：常规分割照射血管内皮细胞导致细胞因子TGF-β1于照射后持续表达。TGF-β1与血管内皮细胞纤维化,血管狭窄和闭塞等晚期放射反应的发生发展有关。提示细胞因子可作为放射反应的作用靶点,预防晚期放射反应的发生。第二部分卡托普利与放疗相互作用对血管内皮细胞EA.Hy926的影响目的：探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)抑制剂卡托普利(Cap)作用于不同放疗时间点的EA.Hy926细胞,细胞因子AngⅡ、NF-κB和TGF-β1等变化情况。方法：MTT法检测Cap作用于EA.Hy926细胞最大有效浓度为10-3mol/1。实验分组为①细胞中加入Cap再进行2Gy×14次放疗；②细胞放疗2Gy×7次加入Cap再进行2Gy×7次放疗；③细胞2Gy×14次放疗后加入Cap。对照组为④完全未照射组；⑤照射前仅加入卡托普利组；⑥照射2Gy×14次组。照射条件为：6MV X线(每天一次,每周五次,总计28Gy),分割剂量2Gy,照射野为30x30cm,源皮距为100cm,剂量率为200cGy/min。设置三个平行样本,在末次照射后提取：mRNA,以未照射组为对照组,采用RT-PCR方法摸索各基因的最佳实验条件,实时定量qRT-PCR方法检测TGF-β1mRNA水平的变化。于末次照射后提取细胞总蛋白,采用western bloting法测定TGF-β1、Iκ-Bα蛋白水平的表达情况。于末次照射后取细胞上清,放射免疫法检测AngⅡ表达情况。于末次照射后取细胞核蛋白,电泳迁移率实验(EMS A法)检测细胞NF-κB活性情况。结果：卡托普利不论在放疗前、中、后作用于EA.Hy926细胞,相对于空白对照组而言,在mRNA水平上,TGF-β1表达升高,但是未达到统计学差异；相对于单纯放疗组而言,TGF-β1表达下降,但未达到统计学差异。在蛋白水平,通过western bloting检测,单纯放疗后组较空白对照组Iκ-Ba表达升高,NF-κB转录活性增加。卡托普利作用组相对空白对照组IK-Bα表达降低；相对于单纯放疗组Iκ-Bα表达降低。结论：血管紧张素Ⅱ抑制剂卡托普利通过阻断血管紧张素Ⅱ的表达,进而削弱NF-κB转录活性,减少TGF-β1表达,从而使细胞纤维化发生减少。
【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R730.55

【参考文献】