DNA-PKcs在辐射刺激液诱导细胞旁效应中作用及机制研究

发布时间：2020-05-12 01:12

【摘要】：目的:观察DNA-PKcs在辐射旁效应中对细胞的影响,探讨DNA-PKcs参与调控辐射诱导细胞旁效应的机制。方法:采用人神经胶质瘤细胞M059K和M059J、人宫颈癌细胞Hela,M059K和Hela细胞为DNA-PKcs表达正常细胞,M059J细胞为DNA-PKcs活性缺失细胞,用DNA-PKcs抑制剂NU7026处理Hela细胞,实验每种细胞分为正常组、辐照组、旁效应组,辐照剂量为2Gy,在2Gyγ辐照后1h构建刺激液模式作为旁效应组。通过细胞生长曲线实验检测DNA-PKcs在辐射旁效应中对细胞生长的影响;细胞克隆形成实验观察DNA-PKcs在辐射旁效应中对细胞增殖的影响;微核试验检测DNA-PKcs在辐射旁效应中对DNA损伤的影响;DCFH-DA法观察DNA-PKcs在辐射旁效应中对活性氧(ROS)含量的影响;流式细胞仪检测DNA-PKcs对细胞周期的影响;Western Blot检测DNA损伤修复蛋白γH2AX、53BP1和CHK2-pT68的表达。结果:1.使用2Gyγ辐照后细胞出现细胞生长缓慢;细胞克隆形成明显减少(P0.05);细胞内微核产生明显增多(P0.05);细胞内ROS含量明显升高(P0.05);流式细胞仪检测细胞周期显示细胞出现不同程度的G2/M期阻滞;Western Blot结果显示细胞内γH2AX、53BP1、CHK2-pT68表达升高。2.辐射旁效应可以导致细胞生长缓慢;细胞克隆形成减少(P0.05);细胞内微核产生明显增多(P0.05);细胞内ROS含量明显升高(P0.05);流式细胞仪检测细胞周期显示细胞出现不同程度的G2/M期阻滞;DNA损伤修复蛋白γH2AX、53BP1、CHK2-pT68表达升高等。3.在DNA-PKcs缺失或失活的情况下,细胞在辐射旁效应中的损伤更为明显,细胞克隆形成减少;细胞内微核产生增多(P0.05);细胞内ROS含量产生明显增多(P0.05);细胞周期阻滞出现明显延长;DNA损伤修复蛋白53BP1表达升高,γH2AX、CHK2-pT68表达减少。结论:1.辐射旁效应能导致效应细胞活力降低;微核产生增多;细胞内ROS含量升高;细胞周期发生G2/M期阻滞;DNA损伤修复蛋白γH2AX、53BP1、CHK2-pT68表达升高。2.在DNA-PKcs缺失或失活的情况下,旁效应组细胞内微核率明显升高,DNA损伤修复蛋白γH2AX、CHK2-pT68表达减少,53BP1蛋白表达增多,细胞受到的辐射旁效应损伤更为严重。3.DNA-PKcs通过调控ROS、细胞周期和DNA修复蛋白γH2AX、CHK2-pT68表达来参与辐射旁效应。
【图文】：

图 3.1 DNA-PKcs 在辐射旁效应中对细胞生长的影响A：M059K B：M059J C：Hela D：Hela+NU7026*与对照组相比 P<0.053.2 克隆形成实验由图 3.2A 可见，M059K 细胞在 2Gy 辐照后 1h 培养 10d，细胞克隆数目与对照组相比减少，同时用条件培养基处理细胞后，细胞克隆数目与对照组相比减少；M059J 细胞在 2Gy 辐照后 1h 培养 10d，细胞克隆数目与对照组相比减少，同时用条件培养基处理细胞后，细胞克隆数目与对照组相比减少。由图 3.2B 可知，M059K 辐照组和旁效应组的存活分数分别为 81.76% 、88.68%，与正常组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）；M059J 辐照组和旁效应组的存活分数分别为 79.15% 、85.99%，，与正常组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。说明M059K 和 M059J 细胞在用 2Gy γ 辐照细胞后的条件培养处理未受辐照的细胞能

图 3.2 DNA-PKcs 在辐射旁效应中对细胞克隆形成的影响M059K 和 M059J 细胞在辐照和条件培养基处理后培养 10d 的克隆形成图；（B）M059和 M059J 细胞的存活分数*与 M059K 对照组相比 P<0.05，#与 M059J 对照组相比 P<0.05由图 3.3A 可见，Hela 细胞在 2Gy γ 辐照后 1h 培养 10d，细胞克隆数目与对相比减少，同时用条件培养基处理细胞后，细胞克隆数目与对照组相比减少 NU7026 处理 Hela 细胞后在 2Gy γ 辐照后 1h 培养 10d，细胞克隆数目与相比减少，同时用条件培养基处理细胞后，细胞克隆数目与对照组相比减少 3.3B 可知，Hela 辐照组和旁效应组的存活分数分别为 80.31% 、86.53%常组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）；NU7026 处理 Hela 后的辐照组效应组的存活分数分别为 61.34% 、85.54%，与正常组相比，差异具有统义（P<0.05）。说明 Hela 细胞和 NU7026 处理 Hela 细胞后用 2Gy γ 辐照
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R818

【参考文献】

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本文编号：2659375