离子液体分散液相微萃

发布时间：2020-10-17 18:09

　　 背景与目的溴敌隆（Bromadiolone），属第二代香豆素类抗凝血杀鼠剂，因其灭鼠效果好、对人畜毒性低，近年来在我国得到认同并普遍使用。但由于使用管理不当，造成了该类鼠药中毒、甚至死亡事件的增加。因此，建立快速高效的生物样品中溴敌隆的检测方法十分必要。 样品前处理是法医毒物分析的关键步骤，直接影响毒物的检出率。传统的样品前处理方法如固相萃取、液液萃取等，存在操作繁琐费时、提取率低、需要使用大量对人体和环境有毒害作用的有机溶剂等问题。分散液相微萃取是由Rezaee等于2006年首次报道的一种新型样品前处理方法，该方法集采样、萃取和浓缩于一体，操作简便快速、成本低、富集效率高且环境友好，是一种很有应用前景的样品前处理技术。方法本研究将离子液体分散液相微萃取技术引入生物检材尿液和血浆中的溴敌隆前处理中，通过考察萃取剂和分散剂体积、样品pH、盐浓度、萃取时间和离心时间等因素，优化前处理条件，获得较好的前处理结果。采用HPLC对前处理样品进行检测。 结果选用离子液体1-己基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐（[C_6MIM][PF_6]）为萃取剂，甲醇为分散剂，提取样品中的溴敌隆。优化后的溴敌隆分散液相微萃取操作条件为：萃取剂[C_6MIM][PF_6]50μL，分散剂甲醇100μL，样品溶液pH值5.0，萃取时间5min，离心时间8min。 本研究建立了溴敌隆的高效液相色谱分析方法。方法采用Symmetry C18反相柱分离，流动相由甲醇（A）、25mmol/L磷酸盐缓冲液（pH=3.0）（B）组成，等度洗脱，A+B=85+15（v/v），流量1.0mL/min，柱温30℃，检测波长260nm。溴敌隆在1.0~500.0μg/mL范围内线性关系良好，相对标准偏差（RSD）小于5%，方法灵敏度高、重现性佳。 在优化的实验条件下，尿液中溴敌隆的检出限为1.1ng/mL（S/N＞3），线性范围为0.01~5.0μg/mL，线性相关系数r=0.9997。空白样品中低、中、高浓度加标回收率分别为82.4%、93.0%、95.6%，相对标准偏差（n=6）分别为6.63%、3.89%、3.86%；血浆中检出限为1.1ng/mL（S/N＞3），线性范围为0.01~5.0μg/mL，线性相关系数r=0.9988。空白样品中低、中、高浓度加标回收率分别为76.4%、82.6%、92.1%，相对标准偏差（n=6）分别为4.17%、2.99%、1.67%。 结论方法可满足中毒样品分析的需要，已成功应用于尿液和血浆中溴敌隆的检测，取得了满意的结果。
【学位单位】：河南科技大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2012
【中图分类】：D919
【部分图文】：

近年来在我国得到认同并普遍使用。但由于使用管理不当、及毒鼠强等剧毒鼠药的禁止使用，造成了该类鼠药中毒事件的不断由于其属慢性鼠药，中毒潜伏期较长，人们发现时多已难以检出。表现为广泛性多脏器出血，出现腹痛、背痛、恶心、呕吐、鼻出血皮下出血、关节周围出血、尿血、便血、精神不振、低热等症状。可见活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）及其（INR）延长，严重者发生休克、昏迷，甚至死亡[5,6]。因此，法作中，建立生物样品中溴敌隆的快速高效检测方法十分必要。敌隆的结构及理化性质敌隆（Bromadiolone）：别名乐万通，化学名为 3-[3-(4'-溴联苯--苯丙基]-4-羟基香豆素，分子量：527.4，分子式为 C30H23O4Br。纯色粉末[7]，熔点 200~210 ℃，微溶于水（19 mg/L，20 ℃）[8]，易醇、氯仿、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂。大鼠口服 LD50为 1.1 mg

id micro-extraction，DLLME）技术。该法是一个基于正确的微萃取技术，萃取剂为密度较高的溶剂，如氯仿、四氯；分散剂要能与萃取剂和水相溶液混溶，如甲醇、乙腈、，是一种快速、经济、回收率高、富集效率高且环境友好8,39]。方法提出后立即得到了广泛的应用[40-43]，展现了良液相微萃取技术的原理相微萃取包含两个步骤：首先，将适当体积的萃取剂和分有目标物的水相样品中，萃取剂立即形成细小的微滴分散富集。由于分散剂的作用，萃取剂和水相样品之间接触面短暂，瞬间达到平衡。萃取速度快为该方法最大的特点。过离心，分析物进入离心管底部沉积相中，用微量注射器析即可。DLLME 步骤如图 1-2 所示[41]。

司）；TG 328B 电光分析天平（上海天平仪器厂）；F津市科亿隆实验设备有限公司）；0.45 μm 有机相针式滤有限公司）。件：Symmetry C18 反相柱（4.6×150 mm，5 μm）；流 mmol/L 磷酸盐缓冲液（pH=3.0）（B）组成，A+B=85+L/min；检测波长：260 nm；进样量：10 μL；柱温：30 讨论长选择工作液经紫外可见分光光度计光谱扫描，获得其紫外吸收。溴敌隆分别在 260 nm 和 207 nm 有最大吸收，为减少杂溴敌隆 HPLC 测定时，选用 260 nm 为检测波长。
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本文编号：2845143