NRP1和miR-9在NSCLC中的表达相关性及辐射抵抗中的作用研究

发布时间：2017-04-13 19:12

  本文关键词：NRP1和miR-9在NSCLC中的表达相关性及辐射抵抗中的作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：在世界范围内,肺癌仍是肿瘤致死的主要原因,其中,非小细胞肺癌约占肺癌的80%。虽然近年来手术、化疗等综合治疗大大改善了治疗效果,但其五年生存率仍低于16%。单独放疗或放疗联合手术治疗或化疗,都是NSCLC患者的主要治疗方案。但是肿瘤细胞辐射抗性的存在减弱了放疗疗效,并产生了放疗后肿瘤的复发、转移。怎样克服肿瘤细胞的辐射抗性已经成为放射生物学和放射肿瘤学研究的热点问题。已有研究报道,NRP1的高表达与NSCLC细胞产生辐射抗性相关,也有研究表明mi R-9通过作用于NRP1来增强A549细胞的辐射敏感性,这些研究均通过体外实验来完成的,而整体水平的研究涉及到神经内分泌调节等复杂的调控网络。那么,NRP1和mi R-9对非小细胞肺癌细胞辐射抵抗中的作用,在整体水平下有无相关性?其下游调控网络又是如何?这些问题尚未见报道,有待于进一步研究。本研究采用q RT-PCR、Western-blot、免疫荧光染色法和免疫组织化学法等实验方法,在整体水平分析探讨机体受照前后NRP1和mi R-9的表达变化及其相关性,以及下游信号通路分子机制。首先,研究分析了临床病理标本中NRP1和mi R-9的表达水平,二者变化与患者临床病理特征之间的关系,相关信号通路分子及血管生成相关因子的表达变化。其次,分析NSCLC荷瘤裸鼠模型的移植瘤中NRP1和mi R-9的表达水平,放疗后肿瘤组织形态学改变及相关信号分子和血管生成相关因子的表达变化。结果显示,在NSCLC中NRP1表达与肿瘤发生淋巴结转移具有相关性;照射前,与正常组织及癌旁组织相比较,肿瘤组织中NRP1表达降低,mi R-9表达升高;而放疗后NRP1表达升高,mi R-9表达降低,且二者的表达呈现负相关关系,从整体水平验证了NRP1与辐射抵抗相关,且受mi R-9的调控;进一步研究发现,NRP1可以通过VEGF、PI3K/AKT通路及MAPK/ERK通路发挥辐射抵抗作用。本文的实验结果将为NRP1成为NSCLC放疗抵抗的潜在分子标志物及提高临床肺癌放疗疗效提供更深层次的实验依据。
【关键词】：NRP1 miR-9 辐射抗性 NSCLC 临床病理特征 信号通路
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2;R730.55
【目录】：

• 内容提要4-5
• 中文摘要5-9
• Abstract9-17
• 英文缩略表17-19
• 第1章 文献综述19-31
• 1.1 肿瘤与放疗19-21
• 1.1.1 肿瘤微环境19-20
• 1.1.2 肿瘤微环境与辐射抵抗20-21
• 1.1.3 肿瘤细胞的辐射抵抗相关信号通路21
• 1.2 NRP121-26
• 1.2.1 NRP1的结构特点及配体/受体结合模式21-22
• 1.2.2 NRP1在肿瘤中的作用22-24
• 1.2.3 肿瘤治疗中NRP1相关的策略24-26
• 1.3. MIRNA与肿瘤26-29
• 1.3.1 micro RNAs26-27
• 1.3.2 mi RNAs与肿瘤27-28
• 1.3.3 mi RNAs与NSCLC临床诊断及预后28
• 1.3.4 mi R-9 与肿瘤28-29
• 1.4. MIRNA与NRP129-30
• 1.5. 立题依据30-31
• 第2章 材料与方法31-47
• 2.1 实验相关的器材与试剂31-33
• 2.1.1 主要实验耗材31
• 2.1.2 实验试剂31-33
• 2.2 主要实验用仪器33-34
• 2.3 试剂的配制34-36
• 2.3.1 细胞实验相关试剂的配制34-35
• 2.3.2 细菌实验相关试剂的配制35
• 2.3.3 Western blot实验相关试剂的配制35-36
• 2.3.4 免疫组化相关试剂的配制36
• 2.4 细胞株36
• 2.5 实验动物36-37
• 2.6 临床非小细胞肺癌组织标本的收集37
• 2.7 照射条件37
• 2.8 HSA-MIR-9 重组质粒的构建37-38
• 2.9 HSA-MIR-9 重组质粒的大提38-39
• 2.9.1 质粒的扩增38
• 2.9.2 质粒的大提38-39
• 2.10 q RT-PCR引物39
• 2.11 核酸表达水平的检测39-41
• 2.11.1 q RT-PCR39-41
• 2.12 蛋白表达水平检测41-45
• 2.12.1 Western blot法41-44
• 2.12.2 免疫组织化学法44-45
• 2.13 动物实验45-46
• 2.13.1 裸鼠移植瘤模型的建立45-46
• 2.13.2 照射条件和方法46
• 2.13.3 荷瘤裸鼠移植瘤的放疗疗效指标46
• 2.14 统计学分析46-47
• 第3章 实验结果47-59
• 3.1 NSCLC临床标本中NRP1和MIR-9 表达及其与临床病理特征的相关性47-54
• 3.1.1 NSCLC临床标本中NRP1 m RNA的表达47
• 3.1.2 NSCLC临床标本中mi R-9 的表达47-48
• 3.1.3 NSCLC临床标本中NRP1蛋白表达及其与mi R-9 表达的相关性48-49
• 3.1.4 不同临床病理学参数与NSCLC患者中NRP1及mi R-9 表达之间的相关性49-51
• 3.1.5 NSCLC临床标本中NRP1及其相关的信号通路分子的表达改变51-52
• 3.1.6 NSCLC临床标本中NRP1及其配体VEGFR2和CD31的表达变化52-54
• 3.2 肺癌的荷瘤裸鼠模型的移植瘤中NRP1与MIR-9 的表达54-59
• 3.2.1 裸鼠荷瘤模型的建立54
• 3.2.2 放疗对移植瘤生长的影响及mi R-9 在其中的作用54-55
• 3.2.3 照射后移植瘤中NRP1 m RNA及mi R-9 的表达55-56
• 3.2.4 放疗对移植瘤中NRP1蛋白及其上下游信号通路分子表达的影响56-57
• 3.2.5 放疗对移植瘤中NRP1及其配体VEGFR2和CD31表达的影响57-59
• 第4章 讨论59-64
• 4.1 临床NSCLC患者组织标本中NRP1与MIR-9 表达变化60-61
• 4.2 临床肺癌患者组织样本中NRP1与MIR-9 表达与临床病理特征之间的相关性61
• 4.3 临床NSCLC组织标本中NRP1下游的信号通路分子表达变化61-62
• 4.4 NRP1与 miR-9 在NSCLC 辐射抵抗中的作用及其分子机制62-64
• 第5章 结论64-65
• 参考文献65-71
• 作者简介71-73
• 致谢73

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