大剂量照射后早期小鼠骨髓表达基因的初步研究

发布时间：2021-07-09 10:14

　　目的 辐射能诱导细胞基因表达的改变，机体辐射损伤效应是大量基因表达变化的结果。骨髓型急性放射病以骨髓等造血组织损伤为基本病变，为深入理解骨髓辐射损伤的分子机制，有必要研究整体照射条件下，辐射前后骨髓基因表达的变化。方法 运用抑制消减杂交（SSH）和cDNA阵列杂交等分子生物学技术，以及序列比对等生物信息学分析方法研究大剂量照射后早期小鼠骨髓基因在mRNA水平的差异表达。结果成功构建C57BL／6J小鼠受7Gyγ射线照射后4hr的骨髓组织相对未受辐射正常对照的消减cDNA文库，经PCR鉴定后，保存480个含差异表达cDNA片段的单克隆。7Gyγ射线照射后4hr C57BL／6J小鼠骨髓表达可能升高的基因有一未命名蛋白、干扰素诱导蛋白（IFIT1）、嗜中性粒蛋白（NPG）、钙结合蛋白（S100a8）、珠蛋白α链（Hba1）、MPG（甲基嘌呤糖基化酶）、CDKN1A（周期蛋白依赖的蛋白激酶抑制蛋白）、CAT（过氧化氢酶）、HO1（血红素加氧酶）和CYP2E1（细胞色素P450家族成员）；表达可能降低的有CCT3（分子伴侣3）、NAT3（N-乙酰转移酶3）、NPM1（核仁蛋白）、PTGS1（前... 

【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市

【文章页数】：98 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

SmartcDNA合成中PCR扩增产物的琼脂糖电泳l一4.照射组(R)eDNA的PCR扩增，循环数依次为15，18，21，24

实验方、驱动方cDNA双链经Rsal酶切后获得平均大小为600bp的平末端酶切片段，琼脂糖电泳显示cDNA双链酶切前后大小的改变，酶切较为充分(如图6)。对酶切产物进一步纯化，纯化产物紫外吸光值比值0D260/0D28。介于1.8一1.9，表明纯度较好，将实验方、驱动方cDNA双链Rsal酶切片段浓度调整为300ng/u1，以备进一步实验。1.2实验方cDNA酶切片段与接头的连接实验方cDNA酶切片段分为两份，与不同接头AdaPtorl、AdaPtorZR连接。为检测连接效率进行PCR扩增，扩增产物进行琼脂糖电泳，由PCR扩增产物的大小和产量推测接头连接效率大于25%，满足进一步实验的要求，引物PCRPrilnerl与两接头序列互补，G3PDH为看家基因

的大小和产量推测接头连接效率大于25%，满足进一步实验的要求，引物PCRPrilnerl与两接头序列互补，G3PDH为看家基因，扩增循环数为25cycle，处于指数扩增期(如图7)。

【参考文献】：
期刊论文
[1]电离辐射对小鼠骨髓造血细胞周期进程的影响[J]. 马淑梅,付士波,鞠桂芝.  辐射研究与辐射工艺学报. 2000(02)
[2]细胞凋亡和细胞增殖抑制在射线损伤造血功能中的作用[J]. 邹仲敏,罗成基.  第三军医大学学报. 1997(02)
[3]γ-射线对哺乳动物细胞核DNA转录活性的影响及其机理研究[J]. 孙志贤,王怀宾,夏寿萱.  细胞生物学杂志. 1983(03)



本文编号：3273555