大鼠骨骼肌早期死亡时间推断的内参基因筛选

发布时间：2022-07-12 14:30

　　目的死亡时间推断是法医病理学实践的重点。运用mRNA定量技术进行死亡时间推断已成为目前研究的热点。在进行mRNA指标挑选时,为了排除其他干扰因素的影响,实验数据必须要经过内参指标的标准化。因此,内参基因的选择对实验结果具有重要影响。方法 SD大鼠颈椎脱臼处死后置于4℃、15℃、25℃、35℃环境温度下,在死后0h、6h、12h、18h、24h五个时间点取骨骼肌组织。利用实时荧光定量PCR技术测定常用内参基因Ct值,并使用三种内参评估软件（geNorm、NormFinder、BestKeeper）综合分析内参稳定性。结论综合三种内参评估软件结果,在低温条件下,RPS29、RPL13是较合适的内参,而在高温条件下,5SrRNA、18SrRNA是较合适的内参。在35℃时,GAPDH、HPRT、PGK1、UBC、B2M与死亡时间有明显相关性。 

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 动物样本
    1.2 总RNA提取及反转录
    1.3 内参及引物挑选
    1.4 实时荧光定量PCR
    1.5 统计学分析
2 实验结果
    2.1 RNA纯度及浓度
    2.2 内参基因引物特异性及扩增性评估
    2.3 基因稳定性分析
        2.3.1 geNorm软件分析
        2.3.2 NormFinder软件分析
        2.3.3 BestKeeper软件分析
    2.4 回归分析
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]大鼠死后管家基因mRNA稳定性及其时序性降解与PMI相关性研究[J]. 刘志杰,董祖鑫,路健,王英元,梁新华.  中国法医学杂志. 2017(05)



本文编号：3659299