痕量DNA中基于单核苷酸多态性的ABO血型检测技术的改进和应用

发布时间：2017-05-18 08:14

  本文关键词：痕量DNA中基于单核苷酸多态性的ABO血型检测技术的改进和应用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：痕量检材是法医学面临的难题之一,如何从痕量检材中获得更多的信息一直是法医学工作努力的方向。随着全基因扩增技术的出现和单细胞测序技术的发展,痕量检材的难题得到了有效解决。ABO血型作为人类重要的遗传表型已在法医学检测中被广泛使用,传统的血清学能够得到准确的分型结果,以ABO基因中突变位点为技术基础的血型DNA检测方法也得到长足发展。两种技术的结合,不仅能够解决痕量检材的难题,而且能够得到与表型相关的信息,为警方搜索犯罪嫌疑人提供一定的帮助。 通过遗传标记进行的身份认证常常用于侦破案件、司法审判及法医亲子鉴定中。在大多数法医DNA检验的实际案件中,所得到的现场检材往往很多都已腐败,甚至是高度腐败,在此类法医学检材中DNA分子受到损害,DNA链发生断裂,使DNA分子的完整性受到极大破坏。随着司法实践的不断深入,对物证证据要求不断提高,需要DNA检验提供更多的信息。应用经典的STRs分型会出现基因漏扩或优势扩增等现象,影响最终的分型结果,从而给法医学实际应用带来极大的困难。 单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism, SNP)作为第三代遗传标记具有分布广泛、突变率低、遗传稳定及易于自动化的高通量快速检测分析的特点,同时,因其扩增片段长度短、不存在复制滑动而利于腐败降解、痕量检材的检测,使得SNPs在法医学领域获得了越来越广泛的重视。遗传学家与人类学家通力合作,从人类进化历程、迁徙历史等角度出发,结合基因组测序及全基因组关联分析技术,对人体色素沉积、颅面发育等与人类表型相关的遗传突变进行了深入研究,构建起用于预测嫌疑人基本特征的个体识别体系。随着身份认证及表型相关的SNPs技术体系的构建,法医物证学中一个“DNA智能化”的新时代正在拉开序幕。 本论文采用实验室自主研发的汗潜指纹提取液(No.200810233535.8)对痕量指纹脱落上皮细胞进行提取,使用全基因组扩增(Whole Genome Amplification, WGA)技术对痕量DNA进行扩增,并结合SNaPshot技术对与ABO血型相关的6个SNPs位点进行检测,进而对ABO血型进行分型。首先,将SNaPshot检测ABO血型方法应用到在痕量DNA中,并结合实验实际对方法进行了优化与调整。随后,收集到48份指纹上皮脱落细胞,同时采集口腔拭子作为阳性对照,使用优化后的ABO血型检测方法对48份样品进行检测,全部48份指纹上皮脱落细胞均得到检出,47份口腔拭子得到检出(第32号样品的口腔拭子由于操作失误在处理过程中损失)。检出的47份结果能够完全匹配。同时,基因型分型的结果与血清学结果一致。优化后的ABO血型检测方法能够在痕量DNA中实现有效检出,对于某些案件的侦破提供一种可行的方法。
【关键词】：单核苷酸多态性 痕量检材 表型预测 ABO血型分型
【学位授予单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：D919.4
【目录】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 第一章 研究背景11-31
• 1.1 SNPs与困难法医学检材12-15
• 1.1.1 法医学中的SNPs分型技术12-13
• 1.1.2 法医学中的困难检材13-15
• 1.2 SNPs与法医学个体识别15-17
• 1.3 SNPs与法医学表型推断与预测17-29
• 1.3.1 ABO血型相关SNPs17-20
• 1.3.2 人体色素沉积相关SNPs20-23
• 1.3.3 易感基因相关SNPs23-26
• 1.3.4 颅面发育相关SNPs26-29
• 1.4 研究意义29-31
• 第二章 在痕量DNA中SNaPshot检测ABO血型方法的构建与优化31-53
• 2.1 材料和方法33-44
• 2.2 实验结果44-49
• 2.3 实验讨论49-53
• 第三章 在痕量DNA中SNaPshot检测ABO血型方法的应用评估53-70
• 3.1 材料与方法53-54
• 3.2 实验结果54-68
• 3.3 实验讨论68-70
• 第四章 总结与展望70-71
• 致谢71-72
• 参考文献72-77
• 附录A 攻读硕士期间发表论文情况77

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 何柏芳;吴银宝;李进;陈慧;杨庆恩;黄代新;;基于通用报告引物的5个Y-SNP复合扩增及其单倍型[J];法医学杂志;2010年01期

2 李莉;柳燕;林源;李成涛;张素华;邵伟波;;67个X-SNP位点的分型检测和连锁不平衡检验[J];法医学杂志;2011年05期

3 蔡海强;柳海涛;史斌;李安;唐文如;罗瑛;;全基因组扩增技术及其在法医个体识别中的应用[J];遗传;2010年11期

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本文编号：375525