硫酸镁防治人脐静脉血管内皮细胞放射损伤机制的初步探索

发布时间：2017-05-18 12:21

  本文关键词：硫酸镁防治人脐静脉血管内皮细胞放射损伤机制的初步探索，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨硫酸镁对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)照射后的存活率、DNA损伤和炎症反应的影响及其可能分子机制。方法:1.CCK-8法检测不同浓度的硫酸镁对HUVEC存活率的影响,筛选合适的硫酸镁工作浓度;克隆形成实验检测硫酸镁对HUVEC克隆形成能力的影响。2.激光共聚焦显微镜观察X射线照射后不同时间HUVEC中γ-H2AX簇集点(foci)的数量;流式细胞术和western blot检测γ-H2AX蛋白的表达情况。3.实时荧光定量PCR方法检测ICAM-1、NF-κB mRNA的表达水平;流式细胞术和细胞免疫荧光法检测ICAM-1蛋白的表达水平;western blot法和细胞免疫荧光法检测NF-κB蛋白的表达水平。结果:1.CCK-8检测结果显示:硫酸镁1.25-6.25 mg/mL浓度范围内对人脐静脉血管内皮细胞无毒性,且1.25 mg/mL浓度的硫酸镁能提高照射后的细胞存活率,大于12.5 mg/mL的硫酸镁对HUVEC表现出明显的增殖抑制作用;细胞克隆形成实验显示,12.5 mg/mL及以上浓度硫酸镁抑制克隆的形成,1.25-2.5 mg/mL浓度范围内硫酸镁可以减轻X射线对HUVEC克隆形成的抑制。2.细胞免疫荧光法、流式细胞术、western blot法证实γ-H2AX foci焦点数在照后0.5-1 h达到高峰,随着时间的延长foci点数变少,强度减弱,具有时间依赖性,1.25 mg/mL硫酸镁作用后可以减少照后foci的数量,降低γ-H2AX蛋白表达水平。3.实时荧光定量PCR结果显示,X射线能增加NF-κB、ICAM-1 m RNA的表达,而1.25 mg/mL硫酸镁能有效降低其表达水平;流式细胞术和细胞免疫荧光法提示硫酸镁能够降低X射线引起的ICAM-1蛋白的增加;western blot法和细胞免疫荧光法提示硫酸镁能够抑制NF-κB的核转位。结论:1.一定浓度的硫酸镁能够增加照后HUVEC的存活率,减轻照射引起的DNA损伤。2.硫酸镁可能通过抑制NF-κB mRNA的表达,阻止NF-κB的核转位来降低ICAM-1 mRNA和蛋白水平的表达,减轻炎症反应。
【关键词】：人脐静脉血管内皮细胞 X射线 硫酸镁 γ-H2AX NF-κB/ICAM-1
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.91;R730.55
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-13
• 第一部分 硫酸镁对人脐静脉血管内皮细胞增殖的影响13-21
• 1.1 实验材料13-14
• 1.1.1 主要试剂及耗材13
• 1.1.2 主要仪器13-14
• 1.2 实验方法14-16
• 1.2.1 细胞冻存、复苏、培养及照射14-15
• 1.2.2 实验内容15-16
• 1.3 实验结果16-19
• 1.4 讨论19-21
• 第二部分 硫酸镁对照射后人脐静脉血管内皮细胞DNA损伤修复的影响21-32
• 2.1 实验材料21-22
• 2.1.1 主要试剂及耗材21-22
• 2.1.2 主要溶液的配制22
• 2.1.3 主要仪器22
• 2.2 实验方法22-26
• 2.2.1 细胞冻存、复苏、培养及照射22-23
• 2.2.2 实验内容23-26
• 2.3 实验结果26-29
• 2.4 讨论29-32
• 第三部分 硫酸镁对照射诱发的HUVEC中ICAM-1、NF-ΚB表达的影响32-43
• 3.1 实验材料32-33
• 3.1.1 主要试剂及耗材32
• 3.1.2 主要溶液的配制32-33
• 3.1.3 主要仪器33
• 3.2 实验方法33-35
• 3.2.1 细胞冻存、复苏、培养及照射33
• 3.2.2 实验内容33-35
• 3.3 实验结果35-39
• 3.4 讨论39-43
• 结论43-44
• 参考文献44-50
• 文献综述50-58
• 参考文献54-58
• 中英文对照缩略词表58-60
• 攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文60-61
• 致谢61-62

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 王宇卉,邵福源;细胞粘附分子与缺血性脑损伤[J];临床神经病学杂志;2001年03期

2 阮林;韦力;廉春蓉;张文佳;莫立根;李小妹;;全脑照射后血脑屏障改变对放射性脑损伤的影响[J];中国神经精神疾病杂志;2011年10期

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本文编号：376063