血液特异性mRNA多态性用于复杂混合斑中血液供者认定

发布时间：2024-07-02 20:42

　　目的:确证血液特异性mRNA分子存在人群多态性,并可利用这种多态性进行混合斑个体识别。方法:本课题利用复合扩增技术(multiplex PCR)和单碱基延伸技术(SNaPshot)对血液特异性mRNA分子上的SNP位点进行检测。构建针对5个血液特异性基因的16个SNP位点的检测试剂盒方法如下:(1)通过文献寻找血液特异性mRNA分子,同时利用NCBI的dbSNP数据库寻找这些基因上的SNP位点。(2)对筛选出的SNP位点利用Primer3软件设计引物。(3)对每对设计好的引物进行引物特异性和体液特异性检测。(4)将所有引物进行复合扩增,并调整复合扩增体系。(5)利用SNaPshot技术检测16个血液特异性SNP位点,得出分型结果。(6)对构建好的体系进行应用性验证并计算法医学参数,包括人群多态性,和对混合斑检测能力的验证。结果:1、成功构建了基于毛细管电泳平台(CE)利用SNaPshot技术检测16个血液特异性SNP位点的检测试剂盒。2、对山西人群进行多态性统计,这一体系的个体识别能力达到0.99929。3、利用该检测体系对混合斑进行分析,在进行血液供者占比为1%的极度不平衡混合斑检测...

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【部分图文】：

图116个血液特异性mRNA分型检测结果

山西医科大学硕士学位论文12图116个血液特异性mRNA分型检测结果图中蓝色峰代表鸟嘌呤（G）；绿色代表腺嘌呤（A）；黑色代表胞嘧啶（C）；红色代表胸腺嘧啶（T）。图片展示的是5ng血液模板所获得的分型结果。3讨论许多混合斑样本由多人多种体液构成，且这种检材往往伴随着极度不平衡混....

图1阴道分泌液，唾液，精液，皮肤特异性检测结果

山西医科大学硕士学位论文222.5混合斑检测结果很多在案发现场发现的检材是混合斑检材，我们这一课题的目的也在于解决多人构成的混合斑和极度不平衡混合斑问题。因此我们制作了两种体液构成的极度不平衡混合斑样本和多人多种体液构成的极度不平衡混合斑样本。对于前者，我们将血液RNA分别与唾液....

图2月经血特异性检测结果

山西医科大学硕士学位论文23图2月经血特异性检测结果利用本体系对5ng月经血模板进行检测电泳结果图。可检测到大部分静脉血特异性SNP位点，但大部分峰的峰高低于500RFU。图3灵敏度检测结果上图表示1ngRNA模板经电泳检测分型结果图，下图表示0.1ngRNA模板经电泳检测结果图....

图3灵敏度检测结果

山西医科大学硕士学位论文23图2月经血特异性检测结果利用本体系对5ng月经血模板进行检测电泳结果图。可检测到大部分静脉血特异性SNP位点，但大部分峰的峰高低于500RFU。图3灵敏度检测结果上图表示1ngRNA模板经电泳检测分型结果图，下图表示0.1ngRNA模板经电泳检测结果图....

本文编号：3999983