BRCA1/p21基因敲除对小鼠放射性心脏损伤的影响

发布时间：2025-03-19 04:06

　　目的:构建内皮细胞BRCA1特异性敲除(endothelial cells-specific BRCA1homozygous knockout,EC-BRCA1^-/-)小鼠和p21基因敲除(p21^-/-)小鼠放射性心脏损伤（radiation-induced heart disease,RIHD）模型,提取原代EC-BRCA1^-/-小鼠心脏微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells-BRCA1^-/-,CMEC-BRCA1^-/-),探讨BRCA1/p21基因敲除对小鼠RIHD的影响。方法:1制备并繁殖p21^-/-小鼠和EC-BRCA1^-/-小鼠,鉴定并筛选p21^-/-小鼠和EC-BRCA1^-/-小鼠作为实验组,p21^+/-小鼠和EC-BRCA1^+/-小鼠作为相应对照组。2采用小动物辐射研究平台对p21...

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

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摘要
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中英文缩略词表
第1章 引言
第2章 材料
    2.1 实验动物
    2.2 主要试剂
    2.3 主要实验设备
    2.4 主要试剂配制
        2.4.1 PBS(pH7.2)
        2.4.2 0.01M TBS
        2.4.3 TBE电泳液
        2.4.4 鼠尾裂解液(10ml)
        2.4.5 10×垂直电泳缓冲液
        2.4.6 1×转膜缓冲液
        2.4.7 10×TBST
        2.4.8 5%脱脂牛奶封闭液
        2.4.9 0.1%BSA/dPBS
        2.4.10 内皮细胞培养基
第3章 方法
    3.1 EC-BRCA1^-/-小鼠和p21^-/-小鼠的繁殖及鉴定
        3.1.1 小鼠繁殖
        3.1.2 小鼠基因型鉴定
    3.2 RIHD小鼠模型构建
    3.3 心功能检测
    3.4 心脏微血管密度检测
    3.5 心脏组织缺氧检测
    3.6 凋亡检测
    3.7 原代心脏微血管内皮细胞提取
        3.7.1 制备CD31 抗体结合的磁珠
        3.7.2 从新生小鼠分离心脏血管内皮细胞
        3.7.3 再次分选心脏内皮细胞
    3.8 BRCA1 蛋白及P21 蛋白检测
        3.8.1 总蛋白提取
        3.8.2 Western Blot步骤
    3.9 统计学方法
第4章 结果
    4.1 P21^-/-小鼠和EC-BRCA1^-/-小鼠基因鉴定
    4.2 小鼠RIHD模型建立
    4.3 P21 基因敲除对小鼠RIHD的影响
        4.3.1 P21^-/-小鼠心脏辐射后生存期缩短
        4.3.2 P21^-/-致小鼠辐射后心脏结构重塑和功能下降
        4.3.3 P21^-/-致小鼠辐射后心脏微血管密度下降
        4.3.4 P21^-/-致小鼠辐射后心脏组织缺氧
        4.3.5 P21^-/-致小鼠辐射后心脏细胞凋亡
        4.3.6 小结
    4.4 内皮细胞BRCA1 敲除对小鼠RIHD的影响
        4.4.1 EC-BRCA1^-/-致小鼠辐射后心脏结构重塑和功能下降
        4.4.2 EC-BRCA1^-/-致小鼠照射后心脏微血管密度下降
        4.4.3 EC-BRCA1^-/-致小鼠照射后心脏组织缺氧加重
        4.4.4 EC-BRCA1^-/-致小鼠照射后心脏细胞凋亡加重
        4.4.5 小结
    4.5 原代细胞CMEC-BRCA1^-/-中P21 蛋白表达下降
第5章 讨论
第6章 结论与展望
    6.1 结论
    6.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：4036634