ANTP-SmacN7融合肽对H460细胞辐射增敏作用的研究

发布时间：2017-06-08 18:19

  本文关键词：ANTP-SmacN7融合肽对H460细胞辐射增敏作用的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的肿瘤的辐射耐受制约了放疗疗效,第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激活剂(Second mitochondria-derived activator of caspase, Smac)蛋白类似物可明显提高辐射诱导的肿瘤细胞凋亡,有望成为新型肿瘤辐射增敏药物。本研究旨在探讨新型Smac蛋白类似物ANTP-SmacN7融合肽对肺癌细胞系H460的辐射增敏作用。方法(1)取对数生长期肺癌H460细胞,分为空白对照组,单纯照射组,ANTP-SmacN7组和照射联合ANTP-SmacN7组,单纯照射组给予0、2、4、6 Gy照射,照射联合ANTP-SmacN7组中ANTP-SmacN7的浓度为20 μmol/L。2) WST-1测定H460细胞的增殖。(3)流式细胞仪测定细胞处理后24和48h的细胞凋亡率。(4) Western blot实验检测caspase3和cleaved caspase3的表达水平。结果(1)ANTP-SmacN7融合能够顺利进入细胞,且能够增强H460细胞的辐射敏感性(F=25.1,P0.01,增敏比为1.86)(2)照射联合ANTP-SmacN7可明显降低H460细胞的克隆形成率()c2=45.2,P0.01；χ2=40.3,P0.01),提高cleaved caspase3的表达量,促进caspase3的活化,增加辐射诱导的细胞凋亡率。结论ANTP-SmacN7融合肽可明显提高H460细胞的辐射敏感性,促凋亡作用这一特性与抑制XIAP的mRNA转录和促进cIAP-1的降解以及caspase的激活有关,ANTP-SmacN7作为一种新的Smac蛋白类似物有望用于肿瘤的辐射增敏治疗。
【关键词】：ANTP-SmacN7 放射增敏 凋亡 DNA双链断裂 凋亡抑制蛋白 caspase
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R730.55
【目录】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-7
• 前言7-12
• 第一章 ANTP-SmacN7融合肽对H460细胞放射增敏作用12-35
• 1.1 实验材料12-16
• 1.1.1 细胞株12
• 1.1.2 主要试剂12-13
• 1.1.3 主要试剂缓冲液的配置13-15
• 1.1.4 细胞培养耗材15
• 1.1.5 主要仪器设备15-16
• 1.2 实验方法16-22
• 1.2.1 多肽合成及纯化16
• 1.2.2 操作前准备16
• 1.2.3 细胞培养16-19
• 1.2.4 ANTP-SmacN7融合肽进入细胞的能力的检测19-20
• 1.2.5 MTT法检测ANTP-SmacN7对肺癌H460细胞的细胞毒性及作用特点20-21
• 1.2.6 细胞克隆形成实验测ANTP-SmacN7对肿瘤细胞的辐射增敏性21-22
• 1.3 实验结果22-28
• 1.3.1 ANTP-SmacN7融合蛋白的合成及纯化22-24
• 1.3.2 ANTP-SmacN7融合肽进入细胞的能力实验结果24-25
• 1.3.3 ANTP-SmacN7对肺癌H460细胞的细胞毒性及作用特点25-26
• 1.3.4 ANTP-SmacN7对肿瘤细胞的辐射增敏作用26-28
• 1.4 讨论28-32
• 参考文献32-35
• 第二章 ANTP-SmacN7对H460细胞放射增敏的作用机制35-47
• 2.1 实验材料35-39
• 2.1.1 细胞株35
• 2.1.2 主要试剂35-36
• 2.1.3 主要试剂缓冲液的配置36-38
• 2.1.4 细胞培养耗材38
• 2.1.5 主要仪器设备38-39
• 2.2 实验方法39-41
• 2.2.1 细胞的培养39-40
• 2.2.2 流式细胞术检测细胞凋亡40-41
• 2.2.4 统计学方法41
• 2.3 实验结果41-43
• 2.4 讨论43-45
• 参考文献45-47
• 结论与展望47-48
• 综述一48-57
• 参考文献52-57
• 综述二57-67
• 参考文献60-67
• 缩略词表67-69
• 在读期间第一作者发表的论文69-70
• 致谢70-71

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