MMP3慢病毒表达载体构建及其修饰的胚胎干细胞的作用

发布时间：2017-06-29 23:00

  本文关键词：MMP3慢病毒表达载体构建及其修饰的胚胎干细胞的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[目的]构建基质金属蛋白酶3(Matrix metalloproteinase3,MMP3)基因过表达慢病毒载体,修饰胚胎干细胞(ES)检测其对成纤维细胞的作用。[方法]克隆MMP3基因,构建EGFP标记的MMP3慢病毒表达载体,用GP2-293T细胞包装慢病毒,修饰ES细胞,与成纤维细胞3T3共培养。镜下观察绿色荧光蛋白表达,Western Blot检测MMP3和TGF-β蛋白表达。[结果]成功钓取MMP3基因,并构建慢病毒表达载体LV-MMP3-EGFP;在转染的GP2-293T细胞中表达绿色荧光蛋白;修饰后的ES细胞表达绿色荧光蛋白,72 h蛋白表达量最高,转染效率达到80%以上;被修饰细胞中MMP3蛋白表达高于对照组,其表达量是对照组的1.5倍;共培养后3T3细胞中TGF-β蛋白表达实验组与对照组无显著变化。[结论]LV-MMP3-EGFP修饰的ES细胞能够大量表达MMP3蛋白,作用于细胞外基质,但是对成纤维细胞中TGF-β表达没有显著影响(P0.05)。
【作者单位】： 长春工业大学化学与生命科学学院;吉林大学白求恩第一医院放疗科;
【关键词】： MMP ES 慢病毒载体 纤维化
【基金】：吉林省科技厅项目(“低氧预处理脂肪干细胞介导HGF/c-Met/PI3K/Akt及PGE2/cAMP/PKA信号通路修复放射性肺损伤的机制研究”,No.20150101141JC)
【分类号】：R818
【正文快照】： 放射性肠纤维化在慢性炎症发生、损伤活动过度以及发生了伤口愈合不可逆转等情况下而产生,肠道遭受损伤,其黏膜发生组织修复及结构重塑,进而引发肠纤维化病症[1]。大量慢性炎性细胞发生聚集,炎性细胞的不断浸润了将会引起ECM的沉积,细胞增殖显著发生,进而形成肠纤维化,ECM的积

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1 李玲;张春丽;闫平;殷雷;康磊;赵倩;王荣福;;放射敏感性启动子调控CD基因/5-FC自杀系统慢病毒载体的构建及~(125)I诱导表达的研究[J];同位素;2012年03期

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本文编号：499596