滇池水域中硅藻的法医学检验

发布时间：2017-07-15 12:14

  本文关键词：滇池水域中硅藻的法医学检验

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【摘要】：[目的]：本研究旨在研究滇池水域中6个地点硅藻的种属差异,运用扫描电镜从形态上找出优势种群,丰富滇池水域中硅藻种群的数据,揭示滇池水域中硅藻群落特征,为溺死尸体判断落水地点奠定基础,用动物实验在扫描电镜阳性结果下,运用18S rDNA测序法,从分子生物学角度检测出硅藻,提高灵敏性,提高检测阳性率,扩大检测范围,缩短检测时间,降低检测难度,为水中尸体的溺死诊断提供更多依据。[方法]：在滇池水域内选取六个水样采集点,分别于冬夏两季各采样500m1。先用微波消解法分别检测滇池水样、家兔和实际检案；再用Chelex-100法、CTAB法和、Power Soil DNA Isolation Kit法提取水中硅藻DNA后,采用PCR技术扩增18S rDNA基因片段,并用琼脂糖凝胶电泳、3130测序技术及BLAST对扩增产物进行检测分析。待实验方法及扩增体系稳定后,取18只家兔进行动物实验,其中2只作为阴性对照,余16只分别抛入采水点使其溺死。分别取实验动物的心、肝、脾、肺、肾进行硅藻检验。[结果]：用Power Soil DNA Isolation Kit法提取硅藻DNA效果优于传统的Chelex-100法、CTAB法和微波消解法；扫描电镜法得出滇池优势种属为冠盘藻、直链藻、菱形藻、小环藻。动物实验得出的溺死家兔肺组织中含有现场水样中的大多数种类硅藻,如直链藻、小环藻、舟形藻、菱形藻等,肝肾脾也可以检出。检案得出的溺死尸体肺组织中含有现场水样中的大多数种类硅藻,如直链藻、小环藻、舟形藻、菱形藻等;肝、肾、脾脏组织中所见硅藻种类有小环藻、冠盘藻、桥弯藻等。检案中的硅藻种属与水样和动物实验基本保持一致。水样用18SrDNA测序法与扫描电镜法结果保持一致;溺死组家兔内脏组织均检测出硅藻18S rDNA扩增产物,与扫描电镜结果一致；肺中检测例数最多,效果最佳；其次为肾、脾、肝和心,且检出率较微波消解-扫描电镜检出率均更高,死后抛尸入水组均无扩增产物。在7例检案中只有一例肺和一例肝中检测到硅藻门,其余为阴性。[结论]：滇池水域中硅藻有冠盘藻、直链藻、菱形藻和小环藻,且用微波消解-电镜扫描联用效果较好,检出率高,可用于水中尸体死亡原因的诊断方法；18S rDNA方法用于动物实验的结果较理想,如果优化硅藻DNA模板,设计更优的硅藻特异性引物,可达到最大扩增效率,实现种属精确鉴定,从而使溺死的鉴定及溺死地点的推断更加准确、更加可信。
【关键词】：硅藻18S rDNA PCR扩增 DNA测序 水中尸体 死因鉴定
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：D919
【目录】：

• 缩略词表5-6
• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 第一章 前言10-14
• 第二章 滇池水样中的硅藻检测方法的建立14-19
• 1 材料与方法14-18
• 2 实验结果18-19
• 第三章 动物实验19-28
• 1 材料与方法19-24
• 2 实验结果24-28
• 第四章 溺死检案实验28-31
• 1 材料与方法28-31
• 2 实验结果31
• 第五章 实验结果的讨论与结论31-34
• 1.实验结果的讨论31-33
• 2.实验结论33-34
• 参考文献34-36
• 附录36-46
• 综述46-54
• 参考文献51-54
• 攻读学位期间获得的学术成果54-55
• 致谢55

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本文编号：543809