芥子气损伤体内诊断生物标志物检测技术的研究芥子气—谷胱甘肽加合物
本文关键词：芥子气损伤体内诊断生物标志物检测技术的研究芥子气—谷胱甘肽加合物
【摘要】： 芥子气即二氯二乙基硫醚,被称为“毒剂之王”,曾经在两次世界大战和两伊战争中使用,同时也是化学恐怖活动的主要威胁手段之一。在应对芥子气引起的化学恐怖袭击和突发化学应急事件时,对其进行快速、准确可靠的侦检是一切救援行动的关键。因此,芥子气中毒人员体内诊断标志物分离检测技术的研究一直是军事分析化学家关注的热点问题。 芥子气属于糜烂性毒剂,可通过皮肤、呼吸道、口腔和粘膜等多种途径使人染毒,是一种细胞毒剂,其进入体内后,可与DNA、蛋白质等生物大分子结合。其中约有50%的芥子气是与谷胱甘肽结合,生成无毒的代谢物后排出体外。因此,芥子气-谷胱甘肽加合物的β裂解产物具有芥子气中毒的特异性。对此类化合物进行的检测技术的研究,将有助于对芥子气暴露人员的诊断和治疗工作的及时开展。 本论文采用GC-MS等现代仪器分析技术,建立了芥子气-谷胱甘肽加合物的β裂解产物的分析检测方法。全文共分为五章。 第一章是前言部分。简要介绍了芥子气的中毒机制和体内代谢特点;论述了关于芥子气-谷胱甘肽加合物的各种产物的检测在芥子气核查中的重要意义,并在此基础上提出论文的研究目的和内容。 第二章则是1,1’-二磺酰基二乙硫醚(SBMTE)标准品的制备及鉴定部分。通过对合成条件的优化,合成了目标化合物。应用柱层析和重结晶法对粗产物进行纯化,最终得到纯度为98.9%的SBMTE。经质谱和核磁共振进行结构鉴定,确证化合物为SBMTE。 第三章应用GC-FPD和GC-FID对染毒尿样中的SBMTE进行检测,比较不同萃取方法的提取效率。尿样浓缩后经GC-FPD检测,检出限为10ng/mL(尿样50μL),可满足芥子气中度后1-3天患者尿样的检测。染毒尿样经GC-FID检测,SBMTE的线性范围0.25-10μg/mL,r=0.9990。 在第四章中,我们建立了模拟尿样中SBMTE的GC-MS定量分析方法。在比较液液萃取和固相萃取(SPE)法的提取效率后,选择了能有效提取SBMTE的固相萃取法;然后考察了SPE柱类型、上样溶液的pH和洗脱溶剂类型对回收率的影响,最终对HLB(亲水亲油型)SPE柱的提取条件进行了优化。乙腈作为洗脱溶剂时,回收率较高。标准品SBMTE的线性范围10-1000ng/mL,回归方程为Y=0.0014X-0.02299,r=0.9993,检出限为5ng/mL。 第五章则建立了染毒尿样中SBMTE的GC-MS分析方法。针对实际生物样品中大量蛋白对内标和目标化合物所产生的干扰,首先考虑了去除蛋白的操作步骤,但此过程复杂、费时,明显降低了回收率。因此,我们对内标和质谱条件进行优化,最终选取了适合的内标物,从而有效去除了空白尿样的干扰。SBMTE的线性范围为1-100ng/mL,r=0.9991,回收率为89.0%~92.6%,检出限为0.5ng/mL(100μL尿样)。
【关键词】：芥子气 谷胱甘肽 气相色谱-质谱 固相萃取
【学位授予单位】：中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R82
【目录】：
- 英文缩写7-8
- 摘要8-10
- Abstract10-12
- 第一章 前言12-18
- 1.1 引言12-17
- 1.1.1 芥子气中毒机制和代谢途径12-13
- 1.1.2 芥子气的检测13-16
- 1.1.2.1 芥子气原型13
- 1.1.2.2 芥子气体内标志物13-16
- 1.1.3 芥子气中毒的防治药物16-17
- 1.2 本论文的研究目的和研究内容17-18
- 1.2.1 研究目的17
- 1.2.2 研究内容17-18
- 第二章 1,1’-磺酰基二(2-甲巯基)乙烷(SBMTE)标准品的制备18-24
- 2.1 引言18
- 2.2 实验部分18-23
- 2.2.1 仪器和仪器条件18-19
- 2.2.2 试剂及溶液配制19
- 2.2.3 实验方法19-20
- 2.2.3.1 芥子亚砜和芥子砜的合成[33]19
- 2.2.3.2 SBMTE 的合成19
- 2.2.3.3 SBMTE 的纯化19-20
- 2.2.4 结果与讨论20-23
- 2.2.4.1 SBMTE 标准品的合成与纯化20-22
- 2.2.4.2 标准品的鉴定22-23
- 2.3 本章小结23-24
- 第三章 模拟尿样和染毒尿样中SBMTE 的GC-FPD、GC-FID 分析方法的建立24-30
- 3.1 引言24
- 3.2 实验部分24-28
- 3.2.1 仪器和设备24-25
- 3.2.2 试剂及溶液配制25
- 3.2.3 实验方法25-26
- 3.2.3.1 模拟尿样和染毒尿样的配制25
- 3.2.3.2 液液萃取法25
- 3.2.3.3 SPE 法25-26
- 3.2.3.4 SBMTE 标准曲线的制备26
- 3.2.3.5 染毒尿样中SBMTE 标准曲线的制备26
- 3.2.4 结果与讨论26-28
- 3.2.4.1 SBMTE 的标准曲线和检出限26
- 3.2.4.2 液液萃取26-27
- 3.2.4.3 SPE 法27-28
- 3.2.4.4 染毒尿样中SBMTE 的线性范围和检出限28
- 3.3 本章小结28-30
- 第四章 模拟尿样中SBMTE 的GC-MS 分析方法的建立30-40
- 4.1 引言30-31
- 4.2 实验部分31-38
- 4.2.1 仪器和设备31
- 4.2.2 试剂及溶液配制31
- 4.2.3 实验方法31-33
- 4.2.3.1 内标物的选择31
- 4.2.3.2 SBMTE 标准曲线的制备31-32
- 4.2.3.3 提取方法比较32-33
- 4.2.3.4 上样pH 对不同提取方法回收率的影响33
- 4.2.4 结果与讨论33-38
- 4.2.4.1 GC 条件的优化33
- 4.2.4.2 SBMTE 稳定性考察33-34
- 4.2.4.3 内标化合物的选择34
- 4.2.4.4 提取方法的比较34-37
- 4.2.4.5 标准曲线和检出限37-38
- 4.2.4.6 尿样pH 值对提取效率的影响38
- 4.3 本章小结38-40
- 第五章 染毒尿样中SBMTE 的GC-MS 分析方法的建立40-53
- 5.1 引言40
- 5.2 实验部分40-52
- 5.2.1 仪器和设备40-41
- 5.2.2 试剂及溶液配制41
- 5.2.3 实验方法41-42
- 5.2.3.1 内标物的选择41
- 5.2.3.2 去除蛋白法41
- 5.2.3.3 提取方法的比较41-42
- 5.2.3.4 染毒尿样SBMTE 标准曲线的制备42
- 5.2.3.5 SBMTE 的回收率和重现性42
- 5.2.3.6 中毒尿样的处理方法42
- 5.2.4 结果与讨论42-52
- 5.2.4.1 空白尿液的GC 分析42-43
- 5.2.4.2 去除蛋白对SBMTE 提取效率的影响43
- 5.2.4.3 内标物的选择43-45
- 5.2.4.4 质谱条件的优化45
- 5.2.4.5 提取方法的比较45-49
- 5.2.4.6 标准曲线和检出限49
- 5.2.4.7 方法的回收率和精密度49-52
- 5.3 本章小结52-53
- 结语53-54
- 参考文献54-56
- 硕士期间发表文章情况56-57
- 芥子气损伤体内标志物及其检测技术的研究进展57-72
- 个人简历72-73
- 致谢73
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