羟喜树碱MePEG-PLA纳米粒的制备及其体外抗肿瘤研究

发布时间：2017-03-27 05:02

  本文关键词：羟喜树碱MePEG-PLA纳米粒的制备及其体外抗肿瘤研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的制备羟喜树碱聚乙二醇单甲醚聚乳酸共聚物纳米粒(hydroxyeamptotheeine-loaded MePEG-block-PLA copolymer nanoparticles, HCPT-MePEG-PLA-NPs),对其进行理化性质及体外释药行为考察,并研究其体外抗肿瘤活性。以期以MePEG-PLA-NPs为载体延长药物的释放时间,增强其抗肿瘤活性。 方法选择HPLC建立HCPT含量测定的分析方法。以聚乙二醇单甲醚聚乳酸共聚物(MePEG-PLA)为载体材料,采用复乳溶剂挥发法(emulsion/solvent evaporation method)制备羟喜树碱MePEG-PLA纳米粒。以纳米粒粒径、包封率及载药量等为评价指标进行处方工艺的单因素考察,并用正交设计试验优化处方工艺,通过透射电子显微镜观察HCPT-MePEG-PLA-NPs外观形态、激光粒度测定仪测定其粒径分布、Zeta电位,超速离心法考察其包封率及载药量,采用透析法考察NPs的体外释药行为,并通过MTT染色法考察其对体外肿瘤细胞增殖的抑制作用、细胞形态结构变化等。 结果建立了HPCP含量测定的HPLC分析方法,在0.2～16.0μg·mL-1范围内呈良好的线性关系(r=0.9997)。经过单因素考察和正交优化确定的HCPT-MePEG-PLA-NPs最佳处方为MePEG-PLA用量为30mg,乳化剂浓度为2.0%,外水相体积为3mL。NPs外观呈圆整球形,平均粒径为(100.13±0.56)nm,多分散系数(PDI)为(0.08±0.02),Zeta电位为(2.31±0.38)mV。HCPT-MePEG-PLA-NPs包封率和载药量分别为(61.40±1.65)%和(0.41-0.02)%；NPs在含20%乙醇的pH7.4PBS释放介质中具有明显的缓释特征,并能有效抑制肿瘤细胞的生长。 结论采用复乳溶剂挥发法制备的HCPT-MePEG-PLA-NPs表面圆整光滑,粒径较小、分布均匀,包封率较高,NPs的体外释放具有明显缓释特征,并有较强的体外抗肿瘤活性。本实验结果为抗肿瘤药物缓释制剂的设计、开发与评价提供重要的理论和实践参考。
【关键词】：羟喜树碱 聚乙二醇单甲醚聚乳酸共聚物 纳米粒 制备 正交设计 理化性质 体外抗肿瘤
【学位授予单位】：浙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R943;R96
【目录】：

• 目录3-6
• 中文摘要6-7
• ABSTRACT7-9
• 前言9-12
• 第一部分 羟喜树碱体外分析方法的建立12-18
• 一、实验材料12-13
• (一) 实验药品与试剂12-13
• (二) 实验仪器13
• 二、方法与结果13-17
• (一) 吸收波长的选择13
• (二) 色谱条件13
• (三) 对照品储备液的配制13-14
• (四) 专属性实验14-15
• (五) 标准曲线的绘制15
• (六) 重复性实验15-16
• (七) 精密度实验16
• (八) 回收率实验16-17
• 三、分析与讨论17
• 四、小结17-18
• 第二部分 羟喜树碱MePEG-PLA纳米粒的制备18-38
• 一、实验材料18-19
• (一) 实验药品与试剂18
• (二) 实验仪器18-19
• 二、方法与结果19-32
• (一) 羟喜树碱MePEG-PLA纳米粒的制备19-25
• 1. 制备方法19
• 2. 单因素考察19-22
• 3. 处方工艺优化22-25
• (二) 羟喜树碱MePEG-PLA纳米粒的理化性质25-28
• 1. 外观形态25-26
• 2. 平均粒径及其分布、PDI和Zeta电位26-27
• 3. 包封率与载药量27-28
• (三) 羟喜树碱MePEG-PLA纳米粒的体外释放28-32
• 1. 释放介质的选择28-29
• 2. 体外释放分析方法的建立29-31
• 3. 体外释放测定方法31
• 4. 体外释放试验结果31-32
• 三、分析与讨论32-37
• (一) 载体材料32-33
• (二) 制备方法33
• (三) 处方工艺因素33-34
• (四) 理化性质34-35
• 1. 外观形态、平均粒径、PDI、Zeta电位34-35
• 2. 包封率与载药量35
• (五) 体外释放35-37
• 四、小结37-38
• 第三部分 羟喜树碱MePEG-PLA纳米粒的体外抗肿瘤活性38-45
• 一、实验材料38
• (一) 实验药品与试剂38
• (二) 实验仪器38
• 二、方法与结果38-43
• (一) 主要试剂的配制38-39
• 1. 细胞培养液的配制38-39
• 2. D-Hanks的配制39
• 3. 胰蛋白酶溶液的配制39
• 4. PBS的配制39
• 5. MTT溶液的配制39
• (二) 体外抗肿瘤研究39-43
• 1. BEL-7402细胞株的复苏与培养39
• 2. 体外抗肿瘤作用39-41
• 3. 细胞形态学观察41-43
• 三、分析与讨论43
• 四、小结43-45
• 结论45-46
• 参考文献46-50
• 致谢50-51
• 文献综述51-58
• 参考文献57-58

【参考文献】

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