链霉菌BOR-0331产生的次级代谢产物Borrelidin的研究

发布时间：2017-04-05 14:16

  本文关键词：链霉菌BOR-0331产生的次级代谢产物Borrelidin的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本实验旨在对链霉菌BOR-0331菌株的发酵产物进行分离纯化,希望从中得到结构新颖、药理活性多样的化合物。血管的形成在肿瘤生长过程中具有举足轻重的意义,阻止该过程是一个有前途的治疗方法。目前临床上的血管生成抑制剂主要集中的大分子生物制剂方面,研究小分子血管生成抑制剂具有很重要的意义。本实验在一株链霉菌BOR-0331发酵液中发现了具有生物活性的组分,TLC行为提示组分含大环内酯类化合物。由于发酵效价极低,针对产生菌的进行紫外诱变,并采用响应面设计等方法对高产株进行发酵培养基优化。初步设计出了该菌株的优势发酵条件,发酵效价达到35.3mg/L。采用大孔吸附树脂柱层析、硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、半制备HPLC等分离手段对菌株的次级代谢产物进行分离纯化,分离到1个化合物。对获得的化合物进行紫外、红外、质谱、核磁等方法分析,证实与文献中报道的大环内酯类抗生素疏螺旋体素(borrelidin)同质。本研究从一株链霉菌BOR-0331产生的次级代谢产物中分离到borrelidin,具有较广泛的生物活性。该化合物有潜力成为小分子血管内皮生长因子抑制剂的先导化合物,对于研究抗肿瘤新药、抗菌药物具有很大的意义,经过诱变育种和发酵条件优化,单位效价达到较高水平为工业化生产奠定基础。
【关键词】：链霉菌 疏螺旋体素 诱变育种 响应面法 发酵优化 分离纯化 结构鉴定
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R915
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-8
• 缩略词表8-9
• 前言9-12
• 第一部分 链霉菌BOR-0331的菌种选育12-18
• 1 实验材料12-14
• 1.1 主要实验设备与仪器12-13
• 1.2 主要试剂与原材料13
• 1.3 实验菌株13
• 1.4 培养基及培养条件13-14
• 2 实验方法14-15
• 2.1 诱变育种14
• 2.2 菌株筛选14-15
• 2.3 实验菌株稳定性试验15
• 2.4 菌种保藏15
• 3 结果与讨论15-17
• 3.1 自然选育结果15
• 3.2 菌株筛选结果15-16
• 3.3 筛选菌株稳定性实验结果16-17
• 4 小结17-18
• 第二部分 链霉菌BOR-0331发酵工艺优化18-33
• 1 实验材料18-19
• 1.1 主要实验设备与仪器18
• 1.2 主要试剂与原材料18-19
• 1.3 实验菌株19
• 1.4 培养基及培养条件19
• 2 实验方法19-24
• 2.1 单因素实验设计19-21
• 2.2 Plackett-Burman实验21
• 2.3 最陡爬坡实验21-22
• 2.4 响应面优化22-23
• 2.5 发酵过程的影响因素及其控制23-24
• 3 结果与讨论24-32
• 3.1 单因素实验设计24-26
• 3.2 Plackett-Burman实验26-27
• 3.3 最陡爬坡实验27
• 3.4 响应面优化27-29
• 3.5 发酵条件优化29-32
• 3.6 优化效率讨论32
• 4 小结32-33
• 第三部分 链霉菌BOR-0331次级代谢产物的提取及分离纯化33-39
• 1 实验材料33-34
• 1.1 主要实验设备与仪器33
• 1.2 主要试剂与耗材33-34
• 2 实验方法34-36
• 2.1 分析制备方法34
• 2.2 发酵产物的提取和纯化34-36
• 3 结果与讨论36-38
• 3.1 发酵液HPLC分析36
• 3.2 TLC分析36-37
• 3.3 发酵产物的提取与纯化37-38
• 4 小结38-39
• 第四部分 化合物的结构鉴定39-45
• 1 实验仪器及材料39
• 2 实验方法39-40
• 2.1 紫外光谱分析39
• 2.2 质谱分析39
• 2.3 红外光谱分析39-40
• 2.4 NMR分析40
• 3 结果与讨论40-44
• 3.1 紫外光谱分析40
• 3.2 质谱分析40-41
• 3.3 红外光谱分析41
• 3.4 核磁共振谱分析41-43
• 3.5 目标化合物的结构鉴定43-44
• 4 小结44-45
• 结语45-46
• 参考文献46-48
• 附图48-53
• 附表53-55
• 综述 血管生成抑制剂及Borrelidin的研究进展55-65
• 参考文献63-65
• 致谢65

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5 邓子新;链霉菌基因表达分子研究的新进展[J];中国抗生素杂志;1990年03期

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