L.plantum和E.coli细胞壁肽聚糖缓释微球对小鼠肠道菌群及机体免疫调节作用的研究

发布时间：2017-04-11 03:24

  本文关键词：L.plantum和E.coli细胞壁肽聚糖缓释微球对小鼠肠道菌群及机体免疫调节作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：肽聚糖的生物活性越来越受到人们的关注,本课题的目的是通过比较革兰氏阳性细菌(植物乳杆菌为代表)和革兰氏阴性细菌(大肠杆菌为代表)细胞壁肽聚糖对肠道菌群组成和机体免疫调节活性的影响,为肽聚糖作为潜在疫苗的开发提供前期的数据支持。本实验通过三氯乙酸法分离了大肠杆菌细胞壁肽聚糖,得到大肠杆菌肽聚糖的提取率为(11.2±1.35%)。并以壳聚糖作为壁材,通过化学交联法制备了大肠杆菌肽聚糖(EPG)微球,通过扫描电镜观察证明EPG微球成球性良好,该微球载药量为(43.51±4.66)g/100g,包封率为(91.20±1.82)%。肽聚糖微球对小鼠肠道菌群及免疫功能的调节作用。研究数据显示:肽聚糖微球组小鼠肠道中的有益菌乳酸杆菌、双歧杆菌显著高于生理盐水组(P0.01),条件致病菌肠杆菌、肠球菌显著低于生理盐水组(P0.01),血清中溶菌酶含量、IgG含量、IL-2含量、肠粘膜中SIgA的含量、肝脏指数、脾脏指数均显著高于生理盐水组(P0.01)。肽聚糖微球对大肠杆菌感染小鼠模型的保护作用。结果显示,肽聚糖微球组小鼠肠道菌群中有益菌的数量显著高于生理盐水组(P0.01),条件致病菌数量显著低于生理盐水组(P0.01),血清中IgG含量、IL-10含量、肠粘膜中的SIgA的含量显著高于生理盐水组(P0.05)。IL-6的含量显著低于生理盐水组(P0.01)。本研究结果表明,大肠杆菌肽聚糖微球成球性良好、性能稳定,两种肽聚糖微球具有良好的调节肠道菌群及机体免疫功能的能力。可以有效增强机体免疫能力,对大肠杆菌感染小鼠引起的小鼠肠道菌群失调、肠道免疫功能紊乱具有有效的且持久的预防保护效果,两种肽聚糖在保护效果上无显著性差异,初步显示肽聚糖在保护效果上具有非特异性,为肽聚糖作为疫苗的进一步开发奠定基础。
【关键词】：肽聚糖复合微球 肠道菌群 免疫调节
【学位授予单位】：黑龙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R965
【目录】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-10
• 第1章 前言10-22
• 1.1 肠道菌群与健康的关系10-11
• 1.1.1 肠道菌群概述10
• 1.1.2 肠道菌群与宿主健康10-11
• 1.2 肠道菌群失调的常见控制措施11-15
• 1.2.1 抗生素治疗11-12
• 1.2.2 益生菌治疗12-13
• 1.2.3 益生元治疗13-14
• 1.2.4 多糖对肠道菌群的影响14-15
• 1.3 细菌肽聚糖的研究及应用15-19
• 1.3.1 细菌肽聚糖概述15-16
• 1.3.2 细菌肽聚糖的免疫效果研究进展16-17
• 1.3.3 细菌肽聚糖应用研究进展17-18
• 1.3.4 肽聚糖作为肠道菌群和机体免疫调节剂的可行性分析18-19
• 1.4 本实验室的前期研究工作基础19
• 1.5 本课题研究的立体依据，研究内容及目的意义19-22
• 1.5.1 立体依据及目的意义19-20
• 1.5.2 研究内容概述20-22
• 第2章 大肠杆菌细胞壁肽聚糖分离及微球的研制22-34
• 2.1 实验材料22-25
• 2.1.1 菌种22
• 2.1.2 培养基22-23
• 2.1.3 实验试剂23-24
• 2.1.4 实验仪器24-25
• 2.2 大肠杆菌细胞壁肽聚糖分离25-26
• 2.2.1 菌种的活化25
• 2.2.2 三氯乙酸法提取肽聚糖25
• 2.2.3 溶菌酶试验25-26
• 2.3 大肠杆菌细胞壁肽聚糖缓释微球制备26
• 2.4 大肠杆菌细胞壁肽聚糖缓释微球结构表征及性能检测26-27
• 2.4.1 EPG微球扫描电镜观察26
• 2.4.2 红外光谱分析26-27
• 2.4.3 热重分析27
• 2.4.4 肽聚糖-壳聚糖缓释微球载药量和包封率检测27
• 2.5 结果与讨论27-32
• 2.5.1 溶解酶实验结果27-28
• 2.5.2 扫描电镜观察EPG微球,CS微球形态28-29
• 2.5.3 傅立叶红外光谱分析(FTIR)29-31
• 2.5.4 热重分析31-32
• 2.5.5 载药量和包封率32
• 2.6 本章小结32-34
• 第3章 EPG微球,LPG微球对小鼠肠道菌群和机体免疫的调节作用34-58
• 3.1 实验材料34-35
• 3.1.1 实验动物34
• 3.1.2 实验材料及试剂34-35
• 3.2 实验方法35-39
• 3.2.1 动物分组和剂量设置35-36
• 3.2.2 肠道菌群检测36
• 3.2.3 血清中溶菌酶含量检测36-37
• 3.2.4 血清中Ig G,IL-2 含量检测37-38
• 3.2.5 肠粘膜中SIg A含量检测38
• 3.2.6 免疫器官指数的测定38-39
• 3.2.7 统计学分析39
• 3.3 结果分析39-53
• 3.3.1 小鼠表观特征观察39
• 3.3.2 各组小鼠肠道菌群变化39-45
• 3.3.3 各组小鼠血清中溶解酶含量变化45-46
• 3.3.4 各组小鼠免疫器官指数的变化46-50
• 3.3.5 各组小鼠Ig G,IL-2,SIg A含量的变化50-53
• 3.4 讨论53-58
• 3.4.1 小鼠免疫器官测定53-54
• 3.4.2 各项检测指标的分析54-58
• 第4章 肽聚糖缓释微球对大肠杆菌感染小鼠的保护效果的研究58-75
• 4.1 实验材料58
• 4.1.1 实验动物58
• 4.1.2 实验材料及试剂58
• 4.1.3 实验仪器和设备58
• 4.2 试验方法58-59
• 4.2.1 大肠杆菌致小鼠肠道菌群失调模型建立58-59
• 4.2.2 缓释微球对肠道菌群失调小鼠保护效果评价59
• 4.3 实验结果讨论59-71
• 4.3.1 小鼠表观特征观察59
• 4.3.2 大肠杆菌感染后各组肠道菌群的含量的测定59-65
• 4.3.3 大肠杆菌感染后不同时间 Ig G、IL-6、IL-10 含量的测定65-69
• 4.3.4 大肠杆菌感染后不同时间肠粘膜SIg A的测定69-70
• 4.3.5 各组小鼠小肠病理学变化70-71
• 4.4 讨论71-75
• 4.4.1 大肠杆菌感染后小鼠肠道菌群数量变化分析71-72
• 4.4.2 大肠杆菌感染后不同时间Ig G,IL-6，，IL-10含量变化分析72-75
• 第5章 结论75-76
• 第6章 本论文的主要创新点及展望76-77
• 6.1 创新点76
• 6.2 展望76-77
• 参考文献77-85
• 致谢85-86
• 攻读硕士期间发表的论文86-87

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