EZH2通过抑制NKG2D的表达调控NK细胞的发育及功能

发布时间：2017-04-12 19:13

  本文关键词：EZH2通过抑制NKG2D的表达调控NK细胞的发育及功能，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨组蛋白甲基化酶EZH2调控NK细胞发育及功能的作用和作用机制。方法:第一部分:从C57BL6小鼠BM中分选出HSCs,体外诱导分化为NK细胞,加入抑制剂以抑制EZH2活性,western blotting检测分化细胞中H3K27me3表达量,流式分析不同分化阶段细胞免疫表型;从人脐带血(umbilical cord blood,UCB)中分离出CD34+HSCs,体外诱导分化为NK细胞,加入抑制剂以抑制EZH2活性,western blotting检测分化细胞中H3K27me3表达量,流式分析在不同分化阶段细胞免疫表型。第二部分:流式分析C57BL6小鼠及人UCB CD34+HSCs在体外分化不同阶段细胞表面NKG2D表达量;ChIP-qPCR检测抑制EZH2活性前后,体外分化的NK细胞中NKG2D启动子区H3K27me3修饰水平变化;细胞杀伤实验检测体外分化的NK细胞的杀伤能力。结果:第一部分:小鼠HSCs体外分化实验的结果显示,抑制EZH2活性后,NK细胞发育进程加快;人UCB CD34+HSCs体外分化结果也显示,抑制EZH2活性后NK细胞发育进程加快。第二部分:小鼠和人HSCs在体外分化不同阶段NKG2D表达量检测结果显示,抑制EZH2活性后,NKG2D的表达量明显上升;ChIP-qPCR实验结果显示,抑制EZH2活性后,NKG2D基因H3K27me3修饰水平明显下降;细胞杀伤实验显示,抑制EZH2活性后,NK细胞的杀伤能力明显下降,且杀伤能力同NKG2D密切相关。结论:1、EZH2可以调控小鼠NK细胞发育。抑制EZH2活性后,可以明显促进小鼠NK细胞发育。2、EZH2可以调控人NK细胞发育。抑制EZH2活性后,可以明显促进人NK细胞发育进程。3、EZH2通过调控NKG2D基因H3K27me3修饰水平以调节其表达,从而促进NK细胞的发育及其功能。4、抑制EZH2活性后,小鼠或人NK细胞杀伤能力明显增加,且同NKG2D密切相关。
【关键词】：NK细胞 EZH2 NKG2D H3K27me3 NK细胞发育 NK细胞功能
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语10-15
• 前言15-18
• 研究现状、成果15-17
• 研究目的、方法17-18
• 一、EZH2对NK细胞发育的影响18-36
• 1.1 对象和方法18-29
• 1.1.1 实验材料18
• 1.1.2 实验药物18-19
• 1.1.3 主要实验试剂19-21
• 1.1.4 主要溶液和缓冲液配制21-23
• 1.1.5 主要实验仪器23-24
• 1.1.6 实验方法24-29
• 1.1.7 统计学分析29
• 1.2 结果29-33
• 1.2.1 EZH2抑制剂对小鼠NK细胞体外发育的影响29-31
• 1.2.2 EZH2抑制剂对人NK细胞体外发育的影响31-33
• 1.3 讨论33-35
• 1.4 小结35-36
• 二、EZH2影响NK细胞发育及功能作用机制研究36-60
• 2.1 对象和方法36-47
• 2.1.1 实验动物36
• 2.1.2 细胞株36
• 2.1.3 主要实验试剂36-37
• 2.1.4 主要溶液和缓冲液配制37-39
• 2.1.5 主要实验仪器39-40
• 2.1.6 实验方法40-47
• 2.1.7 统计学分析47
• 2.2 结果47-54
• 2.2.1 定量PCR引物检测结果47-49
• 2.2.2 小鼠HSC体外分化NK细胞表面NKG2D表达量检测49-50
• 2.2.3 人脐带血HSC体外分化NK细胞表面NKG2D表达量检测50-51
• 2.2.4 体外分化NK细胞中NKG2D基因H3K27me3修饰水平检测51-52
• 2.2.5 EZH2抑制活性后对NK细胞杀伤能力的检测52-54
• 2.3 讨论54-59
• 2.4 小结59-60
• 全文结论60-61
• 参考文献61-70
• 发表论文和参加科研情况说明70-71
• 综述 NK细胞发育及功能的研究71-91
• 综述参考文献84-91
• 致谢91

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈亚琼;刘卫;彭晖;;细胞可塑性与肿瘤治疗耐药的研究进展[J];国际药学研究杂志;2014年03期

2 张百红;岳红云;;肿瘤检查点相关研究进展[J];癌症进展;2015年03期

3 张众;王华新;谢丰培;;乳腺癌异质性及其临床意义[J];临床与实验病理学杂志;2014年05期

4 赵新生;高毅勤;黄岩谊;孙育杰;葛颢;王任小;徐平勇;尉志武;;生物物理化学研究进展[J];化学通报;2014年07期

5 熊化保;司传平;张惠;;固有淋巴细胞研究进展[J];济宁医学院学报;2015年02期

6 颜秋萍;张梦洁;田志强;袁吉钊;;固有淋巴细胞在肿瘤形成中的作用[J];免疫学杂志;2015年07期

7 孟祥红;程小星;;自然杀伤细胞及其受体与结核病研究进展[J];解放军医药杂志;2015年08期

8 杨超;韩凌霞;陈洪岩;;自然杀伤细胞受体与功能的研究进展[J];实验动物科学;2013年05期

9 许永杰;李学英;王大忠;罗蔓莉;;烧伤与自然杀伤细胞关系的研究进展[J];实用医学杂志;2014年01期

10 文路;汤富酬;;单细胞转录组分析研究进展[J];生命科学;2014年03期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 文路;汤富酬;;单细胞转录组分析研究进展[A];生命科学——专题：RNA研究的新技术和新方法（第26卷第3期）[C];2014年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 闵江;结直肠癌中新的细胞亚群NCCC的分离与生物学功能的研究[D];华中科技大学;2013年

2 姜晓君;成年肝脏造血免疫系统发育分化及其特有NK细胞亚群研究[D];中国科学技术大学;2013年

3 王福艳;人未成熟和成熟NK细胞的分子特征及其转录调控网络[D];中国科学技术大学;2014年

4 毕嘉成;NK细胞抑制性受体TIGIT的功能研究[D];中国科学技术大学;2014年

5 闵江;结直肠癌中新的细胞亚群NCCC的分离与生物学功能的研究[D];华中科技大学;2013年

6 何瑜;IFN-α调节NK细胞CD100表达在抗HCV感染中的分子机制研究[D];第四军医大学;2014年

7 隋强君;阻断肝癌细胞STAT3信号通路激发机体抗肿瘤免疫应答作用机制研究[D];山东大学;2014年

8 倪超;静息大肠癌干细胞的鉴定及其IFN-γ靶向清除研究[D];浙江大学;2014年

9 沈俊杰;Nanog阳性肝癌细胞在肝癌干细胞层级分化中的地位与作用研究[D];第三军医大学;2014年

10 王旭丹;四神丸治疗DSS诱导的小鼠实验性结肠炎免疫机制的研究[D];北京中医药大学;2015年

中国硕士学位论文全文数据库 前7条

1 魏寅翼;酶育牛黄抗肿瘤作用及其机制的初步研究[D];泰山医学院;2013年

2 彭宏君;p38 MAPK信号转导通路在肠道病毒71型感染中的作用机制[D];苏州大学;2014年

3 杨超;鸡NK细胞的分离鉴定及靶细胞筛选[D];中国农业科学院;2014年

4 王萌萌;急性白血病儿童NK细胞受体NKG2D、NKp46及KIR2DL1表达率分析的研究[D];青岛大学;2014年

5 李晓东;食管癌患者手术前后外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞及IL-12测定的临床意义[D];皖南医学院;2014年

6 杨佳;自噬在NK细胞抗肿瘤效应中作用及其机制研究[D];浙江大学;2015年

7 崔磊;自表达SIRPα-Fc融合蛋白对T细胞功能的影响[D];浙江理工大学;2015年

  本文关键词：EZH2通过抑制NKG2D的表达调控NK细胞的发育及功能，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：301952