酶法高通量测定发酵液中代谢产物的研究

发布时间：2017-04-14 17:01

  本文关键词：酶法高通量测定发酵液中代谢产物的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：腺苷和胞苷都是非常重要的医药原料,基于腺苷脱氨酶(ADA)和胞昔脱氨酶(CD)建立快速、高通量检测发酵液腺苷和胞昔的方法,以及对于产胞苷的枯草芽孢杆菌进行激光诱变育种的初步研究。方法：以碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液、亚硝基铁氰化钠、次氯酸钠以及百里香酚为检测试剂,采用响应面方法优化检测试剂。在腺苷脱氨酶(ADA)的作用下,绘制腺苷检测标准曲线,确定腺苷检测限。同样,在胞苷脱氨酶(CD)的作用下,绘制胞苷检测标准曲线,确定胞苷检测限。采用激光诱变育种,对产胞苷的枯草芽孢杆菌进行筛选,初步确定优化条件。结果：响应面方法优化检测试剂浓度为碳酸钠-碳酸氢钠34.20 mmol/L-27.40 mmol/L,亚硝基铁氰化钠3.35 g/L,次氯酸钠的有效氯为0.1725%,百里香酚6.64g/L。腺苷标准曲线回归方程为y=0.3901x+0.01248,R2=0.9976,检测范围为0.025 mM-6 mM。胞苷标准曲线回归方程为y=0.36045x+0.06313,R2=0.99702,检测范围为0.1 mM-6mM。对产胞苷枯草芽孢杆菌进行初步激光诱变育种的结果为筛选剂浓度为1.2 g/L,激光诱变时间为1.5 min,枯草芽孢菌产生胞苷含量最大的浓度为74.04 mg/L。结论：该方法检测灵敏,能够满足对腺苷和胞苷发酵检测和高通量筛选的需要。我们的研究为进一步提高激光诱变育种的胞苷产量进行了初步探索。
【关键词】：腺苷 胞苷 百里香酚 高通量检测 响应面 激光诱变育种
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 第一章 前言8-15
• 1.1 腺苷的研究的现状8-10
• 1.2 胞苷的研究现状10-11
• 1.3 百里香酚11
• 1.4 枯草芽孢杆菌11-12
• 1.5 激光诱变育种技术12-14
• 1.6 立题依据14-15
• 第二章 材料15-20
• 2.1 实验菌种15
• 2.2 实验仪器15-17
• 2.3 实验试剂17-19
• 2.4 实验培养基19
• 2.5 试剂的配制19-20
• 第三章 实验方法20-26
• 3.1 菌种培养方法20-21
• 3.1.1 菌种活化20
• 3.1.2 种子培养20
• 3.1.3 摇瓶发酵20-21
• 3.2 酶法高通量检测发酵液中的腺苷含量21-24
• 3.2.1 腺苷脱氨酶快速检测原理21
• 3.2.2 单因素优化检测试剂21-22
• 3.2.3 响应面优化检测试剂22
• 3.2.4 验证试验22
• 3.2.5 腺苷脱氨酶快速检测方法22
• 3.2.6 腺苷标准曲线制定22-23
• 3.2.7 腺苷加标回收实验23
• 3.2.8 高效液相色谱检测实验23-24
• 3.3 酶法高通量检测发酵液中的胞苷含量24
• 3.3.1 胞苷脱氨酶快速检测原理24
• 3.3.2 胞苷脱氨酶快速检测方法24
• 3.3.3 胞苷标准曲线测定24
• 3.3.4 胞苷加标回收实验24
• 3.4 对枯草芽孢杆菌进行初步激光诱变筛选24-26
• 第四章 结果26-47
• 4.1 试剂浓度优化26-33
• 4.1.1 单因素优化26-28
• 4.1.2 响应面优化方法28-32
• 4.1.3 验证实验32-33
• 4.2 腺苷脱氨酶法高通量测定发酵液中的腺苷含量33-35
• 4.2.1 腺苷标准曲线33
• 4.2.2 腺苷加标回收实验33-35
• 4.3 胞苷脱氨酶法高通量测定发酵液中的胞苷含量35-38
• 4.3.1 胞苷标准曲线35-36
• 4.3.2 胞苷加标回收实验36-38
• 4.4 对枯草芽孢杆菌进行初步激光诱变育种38-47
• 第五章 讨论与结论47-49
• 5.1 实验讨论47-48
• 5.2 实验结论48-49
• 参考文献49-54
• 在学期间的科研成果54
• 在学期间参与项目54-55
• 附录一55-56
• 附录二56-57
• 致谢57

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 肖创清,卢义钦;胞苷脱氨酶的检测及其临床意义[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;2000年06期

2 杨革,陈坚,曲音波,伦世仪;聚γ-谷氨酸生产菌地衣芽孢杆菌的He-Ne激光辐射效应[J];激光生物学报;2001年04期

3 武顺,孙中安,任冬梅;三磷酸胞苷治疗糖尿病周围神经病变的临床观察[J];临床军医杂志;2003年06期

4 唐晋清;谢晓恬;李威;乔晓红;石苇;周晓迅;邵越霞;;HL-60细胞内阿糖胞苷活性成分动态观察[J];临床儿科杂志;2013年06期

5 ;Optimization of a synthetic medium for ethanol production by xylose-fermenting Zymomonas mobilis using response surface methodology[J];Chinese Science Bulletin;2012年Z2期

6 郭怀忠,陈蓉,李芳,毕开顺,孙毓庆;毛细管区带电泳法测定板蓝根注射液中四种核苷的含量[J];色谱;2004年05期

7 林家仕;林子俺;刘英杰;;高效液相色谱分析不同低氧训练模式下大鼠心肌组织腺苷酸含量变化特征[J];体育科学;2009年02期

8 黄兰芳,郭方遒,梁逸曾,陈本美;HPLC-ESI-MS测定冬虫夏草和蚕蛹虫草中腺苷和虫草素含量[J];中国中药杂志;2004年08期

9 郝纯毅,吕桂芝,蔡险峰,林仲翔;三磷酸腺苷对人胃癌细胞恶性表型的去恶化作用[J];中华肿瘤杂志;1999年03期

10 金伟明;张秋;;血清腺苷脱氨酶测定在肝病诊断的意义及临床评价[J];中国实验诊断学;2007年06期

  本文关键词：酶法高通量测定发酵液中代谢产物的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：306420