CRH家族肽对肿瘤细胞凋亡和迁移的影响及其机制研究

发布时间：2017-04-15 19:17

  本文关键词：CRH家族肽对肿瘤细胞凋亡和迁移的影响及其机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin-Releasing Hormone,CRH)家族肽主要成员包括CRH,Urocortin1(Ucn1),Urocortin2(Ucn2)和Urocortin3(Ucn3),它们广泛分布在机体的中枢神经系统和外周系统,并且通过细胞膜上CRH受体(CRH Receptors,CRHRs)发挥多种作用。CRH受体包括CRH 1型受体(CRHR type 1,CRHR1)和CRH 2型受体(CRHR type 2,CRHR2)。CRHRs属于G蛋白偶联受体,在不同的组织中发挥着不同的病理生理作用。本部分主要探讨了CRHRs对前列腺癌细胞凋亡的影响,并揭示了这种作用是通过调节胞浆型磷脂酶A2(cytosolic phospholipase A2,c PLA2)的表达或活化水平实现的。实验中采用小鼠前列腺癌细胞株RM-1细胞作为研究对象。Annexin V/PI双染色后流式细胞仪检测结果显示:正常无处理组的细胞平均凋亡率为3.92%,并且CRH处理组的细胞平均凋亡率为9.76%,与对照组相比细胞平均凋亡率有所上升;而同时给予Ucn2和凋亡促进剂TG处理后的细胞平均凋亡率(8.18%)与单独给予TG处理(14.84%)相比明显下降。近年来大量研究发现c PLA2的异常表达与多种肿瘤的发生发展有关,为了明确CRH家族肽对细胞凋亡的作用是否依赖于c PLA2,本实验选择将c PLA2干扰后继续检测细胞凋亡的情况,结果显示:c PLA2干扰后给予CRH处理,细胞平均凋亡率从9.76%降至5.31%,有明显统计学差异;而同时给予TG和Ucn2处理后,细胞平均凋亡率从8.18%降至4.59%,也有明显统计学差异。总之,将c PLA2干扰后,CRH通过CRHR1诱导细胞凋亡的能力减弱,同时CRH升高凋亡促进蛋白Bax和降低凋亡抑制蛋白Bcl-2表达的能力消除;但是将c PLA2干扰后,Ucn2通过CRHR2抑制细胞凋亡的能力增强,同时Ucn2降低凋亡促进蛋白Bax和升高凋亡抑制蛋白Bcl-2表达的能力明显增强。有研究指出促炎因子IL1β、TNFα能促进c PLA2的表达,本部分实验结果提示:CRH可以呈时间和浓度依赖性地增加c PLA2的表达,在这一过程中IL1β参与其中的调控机制;而Ucn2却减少c PLA2的表达,意料之外的是在这一过程中TNFα、IL1β均未参与其中的调控机制。此外CRH也能抑制c PLA2 m RNA的分解,增加c PLA2的稳定性,而Ucn2却只能抑制c PLA2的产生,并不能促进其分解。为了进一步明确CRHRs的作用,在HEK293细胞中分别预先过表达CRHR1和CRHR2,再分别给予CRH或者Ucn2刺激,结果发现c PLA2的表达受到相应地上调或者下调。综上所述,本部分研究得出结论CRH和Ucn2能通过影响c PLA2的表达分别促进和抑制前列腺癌细胞的凋亡。CRH家族肽是一类重要的内分泌相关肽,主要包括CRH,Urocortin1(Ucn1),Urocortin2(Ucn2)和Urocortin3(Ucn3),通过两种细胞膜受体CRH 1型受体(CRHR1)和CRH 2型受体(CRHR2)参与调节多种肿瘤细胞的增殖、凋亡和转移能力等,其中CRH家族肽影响肿瘤细胞转移能力的机制尚不明确。有研究发现异常的转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGFβ1)信号与多种肿瘤的发生发展有关。在肿瘤发生初期,TGFβ1可以抑制细胞增殖、启动细胞分化并诱导凋亡;但在肿瘤发生晚期,TGFβ1却被认为是上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)的诱导因子,并且通过诱导Snail1和Slug等转录因子的表达来抑制上皮钙粘蛋白(E-cadherin),而E-cadherin是细胞与细胞间的联接蛋白,其表达下调是EMT发生的标志性变化。因此,TGFβ1信号通路的异常激活能促进晚期肿瘤的转移。同时流行病学调查显示超过90%的乳腺癌患者最终死于肿瘤转移。本部分研究主要探讨了乳腺癌细胞中Ucn1对TGFβ1诱导下Snail1Slug的影响及其作用机制。实验中采用两种人乳腺癌细胞株(MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞)作为研究对象。TGFβ1-Smad是经典的TGFβ1信号传导途径,并且Smad2/3是TGFβ1经典信号传导通路中重要的信号传导因子。实验结果提示Ucn1能减少Smad2/3的磷酸化水平,但是将Smad7干扰后Ucn1的作用被消除。并且Ucn1能进一步阻止磷酸化的Smad2/3转入细胞核内继而下调E-cadherin抑制性转录因子如Snail1Slug,从而抑制EMT的发生。考虑到Ucn1与两种受体的亲和力相当,为了明确两种受体的作用,本实验中分别使用了CRHR1选择性阻断剂Antalarmin、CRHR2选择性阻断剂Antisauvagine-30以及C RHRs非选择性阻断剂Astressin。结果发现这三种阻断剂都能部分消除Ucn1对TGFβ1信号通路的影响,并提示两种受体均能下调Ucn1抑制TGFβ1诱导的Snail1Slug表达。综上所述,本部分指出Ucn1可能作为一种中间介质,抑制TGFβ1促进乳腺癌细胞的上皮间质转化,并且在这一过程中CRHR1/CRHR2,Smad7,Smad2/3以及Snail1Slug等信号通路被激活。
【关键词】：CRH 1型受体 CRH 2型受体 胞浆型磷脂酶A2(c PLA2) 凋亡 Urocortin1 转化生长因子β1 Smad2/3 Smad7 上皮间质转化
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 英文缩写词表4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 第一部分CRH与Ucn2对前列腺癌细胞凋亡的影响及其机制研究11-37
• 前言11-12
• 正文12-31
• 结论31-32
• 参考文献32-37
• 第二部分Ucn1对TGFβ1诱导下乳腺癌细胞Snail1&Slug的影响及其机制研究37-63
• 前言37-38
• 正文38-57
• 结论57-58
• 参考文献58-63
• 综述63-74
• 参考文献69-74
• 附录74-75
• 硕士在读期间发表论文75-76
• 致谢76

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王华东,王彦平,屈洋,戚仁斌,陆大祥,李楚杰,颜亮;cAMP依赖性蛋白激酶信号传导通路在大鼠CRH性发热机制中作用[J];中国病理生理杂志;2000年10期

2 江胜贤;黄大有;;CRH及CRH兴奋试验的临床应用[J];国外医学(内分泌学分册);1992年01期

3 孟凡江;CRH和赖氨酸血管加压素刺激试验在诊断继发于下丘脑或垂体疾病的肾上腺皮质功能减退中的应用[J];国外医学.内分泌学分册;1991年02期

4 黄坚;覃华丽;黄显凯;周继红;;CRH对大鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响[J];创伤外科杂志;2006年01期

5 王华东 ,王彦平,屈洋,戚仁斌,陆大祥,李楚杰,颜亮;cAMP依赖性蛋白激酶信号传导通路在大鼠CRH性发热机制中的作用(英文)[J];Chinese Medical Journal;2001年10期

6 张载福;;抑郁症认知因素与CSF中CRH的关系[J];国外医学.精神病学分册;1991年01期

7 张云东,朱佩芳,王正国,赵继宗,周继红,许民辉,邹咏文,黄显凯,粟永萍;CRH对培养下丘脑神经元胞浆cAMP作用的探讨[J];脑与神经疾病杂志;2003年03期

8 唐美仪，程丽仁，，张崇理;CRH样肽对大鼠胚泡着床的影响[J];基础医学与临床;1996年01期

9 赵宏,张丽凤;促肾上腺皮质激素释放激素与下丘脑-垂体-性腺轴[J];承德医学院学报;2001年03期

10 陈立朝,许民辉,周继红;CRH通过PKA途径调节大鼠下丘脑CRH表达的研究[J];第三军医大学学报;2004年16期

中国重要会议论文全文数据库 前4条

1 胡随瑜;李云辉;张春虎;王素娥;肖桂林;邱娟;;柴胡疏肝散对慢性应激抑郁模型大鼠行为及血浆CRH、ACTH的影响[A];中国中西医结合学会精神疾病专业委员会第十届学术会议论文集[C];2010年

2 林洁;;浅谈CRH_(5A)型动车组牵引电机的维护保养[A];2012年铁路技师论文集（安全专辑）[C];2013年

3 王东琪;Bockmann,A;Dolenc,J;Meier,BH;van Gunsteren,WF;;Crh蛋白质微晶中水分子运动的计算机模拟[A];中国化学会第29届学术年会摘要集——第15分会：理论化学方法和应用[C];2014年

4 李金梁;龚忠鑫;古文超;;浅谈CRH_(5A)型动车组空调压缩机控制电路故障应急处理方法[A];2012年铁路技师论文集（安全专辑）[C];2013年

中国重要报纸全文数据库 前7条

1 白雪;世界水泥巨头CRH看好中国市场[N];中国建材报;2009年

2 吴文坤;欲购中条山水泥国际建材巨头CRH进晋之谋[N];中华建筑报;2010年

3 记者朱大明;深度推进长春同爱尔兰CRH集团战略合作[N];长春日报;2009年

4 高李鹏;国产动车组CRH在沪宁线沪杭线投入运营[N];人民铁道;2007年

5 张才春　梁成谷;国产动车组CRH即将投入铁路春运[N];人民铁道;2007年

6 记者　 焦红霞;国产动车组CRH将投入铁路春运[N];中国改革报;2007年

7 唐尧;CRH、和谐号、动车组和高速铁路、高铁[N];语言文字周报;2010年

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 张悦;内质网应激介导的CRH诱导大鼠海马神经元凋亡[D];河北医科大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前3条

1 戴龙芳;妊娠期高血压疾病患者血浆中E、NE和CRH含量与季节型气候的关系及临床意义[D];南昌大学;2012年

2 李传华;CRH家族肽对肿瘤细胞凋亡和迁移的影响及其机制研究[D];南京医科大学;2015年

3 白崇生;CRH、ACTH和GC对体外培养染铝大鼠脾淋巴细胞免疫功能的影响[D];东北农业大学;2013年

  本文关键词：CRH家族肽对肿瘤细胞凋亡和迁移的影响及其机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：309075