染料木素对Aβ诱导的神经细胞线粒体功能异常的保护作用及机制研究

发布时间：2017-04-21 06:43

  本文关键词：染料木素对Aβ诱导的神经细胞线粒体功能异常的保护作用及机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：染料木素（Genistein，Gen）是大豆异黄酮苷元的主要成份之一，，广泛存在于豆科植物中。染料木素被称为植物雌激素，在人体内可与雌激素受体结合发挥弱雌激素样作用和抗雌激素活性。研究表明，染料木素不仅对心血管疾病、骨质疏松、肿瘤等均具有防治作用，而且对AD等神经系统退行性疾病具有一定的预防和治疗作用，现广泛应用于制药、营养保健品等领域。本课题组前期研究表明，染料木素可作用于海马神经细胞，通过蛋白激酶C(Protein kinase C， PKC)快速信号转导通路进而调节α、β-分泌酶活性，抑制Aβ形成与沉积，降低细胞内Ca2+浓度，提高Bcl-2/Bax的比值，从而抑制Aβ神经毒性，发挥神经保护作用。目前，有关染料木素的神经保护作用研究比较深入，但更为深入的机制研究如有关线粒体介导的神经细胞凋亡信号转导通路报道较少。本论文将继续在细胞水平就染料木素的细胞保护作用及其分子机制作进一步的研究。具体内容如下： 1.染料木素对Aβ诱导的PC12细胞线粒体形态及活力的影响研究：以Aβ25-35毒素诱导PC12细胞损伤，构建细胞损伤模型，用不同浓度的Gen预处理2h后，再加入Aβ25-35继续孵育24h， MTT法检测PC12细胞存活率；MitoTracker Green FM线粒体荧光探针检测线粒体形态变化；2，6-二氯苯酚靛酚钠（2，6-DPIP）还原法测定琥珀酸脱氢酶（SDH）活力；分光光度法测定Na+-K+-ATP酶活力。结果发现Gen能改善Aβ25-35诱导的PC12细胞线粒体形态，提高线粒体琥珀酸脱氢酶活力及Na+-K+-ATP酶活力。 2.染料木素对Aβ诱导的PC12细胞自由基清除及氧化应激的影响研究：DCFH-DA荧光探针检测活性氧（ROS）生成；硫代巴比妥酸（TBA）法测定丙二醛（MDA）含量；黄嘌呤氧化法测定超氧化物歧化酶（SOD）活力。结果发现Gen能减少Aβ25-35诱导的PC12细胞活性氧生成量，降低MDA含量，提高SOD活性的功能。 3.染料木素对Aβ诱导的PC12细胞线粒体膜电位及膜通透性的影响研究：罗丹明123荧光染料检测线粒体跨膜电位（△ψm）；ELISA双抗体夹心法测定胞内细胞色素C浓度；分光光度法检测Caspase-3活性。结果发现Gen能稳定Aβ25-35诱导的PC12细胞线粒体跨膜电位，减少细胞色素C的释放，抑制Caspase-3活性。 研究结果表明，染料木素通过改善PC12细胞线粒体形态、稳定线粒体膜电位及膜通透性、提高细胞活力以及自由基清除和氧化应激能力，从而抑制Aβ诱导的PC12细胞损伤和线粒体功能异常。
【关键词】：染料木素 阿尔茨海默病 β淀粉样蛋白 线粒体
【学位授予单位】：广东药学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-19
• 一、 β淀粉样蛋白神经毒性与线粒体功能异常研究10-15
• 1. Aβ的形成与其神经毒性10-11
• 2. Aβ神经毒性与线粒体功能异常11-15
• 二、 染料木素研究概况15-17
• 1. 神经保护及治疗神经退行性疾病15
• 2. 抗肿瘤作用15-16
• 3. 抗氧化作用16
• 4. 降血脂16
• 5. 防治骨质疏松症16-17
• 6. 预防心血管疾病17
• 三、 本研究的目的与意义17-19
• 第一章 染料木素对 PC12 细胞线粒体形态及活力的影响研究19-33
• 第一节 不同浓度 Gen 对 Aβ诱导损伤的 PC12 细胞活力的影响19-24
• 1 实验材料和仪器19-21
• 2 PC12 细胞培养21
• 3. 细胞活性测定21-22
• 4. 统计分析22
• 5. 实验结果22-23
• 6. 讨论23-24
• 第二节 染料木素对 PC12 细胞线粒体形态及活力的影响24-31
• 1 实验材料和仪器24-26
• 2. 实验分组26
• 3． PC12 细胞线粒体形态的观察26
• 4. PC12 细胞线粒体的提取分离26
• 5. PC12 细胞线粒体琥珀酸脱氢酶的测定26-27
• 6. PC12 细胞线粒体 Na+-K+-ATP 酶测定27
• 7. 统计分析27
• 8. 实验结果27-30
• 9. 讨论30-31
• 小结31-33
• 第二章 染料木素对 PC12 细胞自由基清除及氧化应激的影响研究33-43
• 1 实验材料和仪器33-35
• 2.实验分组35
• 3. PC12 细胞活性氧的测定35
• 4. PC12 细胞丙二醛的测定35-36
• 5. PC12 细胞超氧化物歧化酶的活性测定36
• 6. 统计分析36
• 7. 实验结果36-40
• 8.讨论40-42
• 小结42-43
• 第三章 染料木素对 PC12 细胞膜电位及膜通透性的影响研究43-54
• 1 实验材料和仪器43-45
• 2. 实验分组45
• 3. PC12 细胞膜电位的测定45
• 4. PC12 细胞细胞色素 C 检测45-46
• 5. PC12 细胞 Caspase-3 活性的测定46-47
• 6.统计分析47
• 7.实验结果47-52
• 8.讨论52-54
• 小结54
• 总结与展望54-56
• 参与文献56-63
• 附录 缩写词注释63-64
• 攻读硕士学位期间发表的论文及成果64-65
• 致谢65

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 赵黔鲁,柴锡庆;鱼藤酮致PC12细胞线粒体功能及超微结构的影响[J];第三军医大学学报;2005年07期

2 罗思婧;黄庆;任冬冬;廖维良;杨红;;染料木素的神经保护作用及其机制的研究进展[J];广东药学院学报;2011年01期

3 方希敏,陈铭珍,陈日玲;细胞色素C与细胞凋亡[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;2005年01期

4 金永生;刘超美;;金雀异黄素的药理作用[J];国外医药(植物药分册);2002年05期

5 陈慧莉;李建华;郝桂兰;邵明霞;李来传;王树庆;杨兆禄;;自制愈障汤对再生障碍性贫血大鼠骨髓造血细胞线粒体形态及跨膜电位的影响[J];山东医药;2009年11期

  本文关键词：染料木素对Aβ诱导的神经细胞线粒体功能异常的保护作用及机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：319743