LKB1对大肠癌血管生成及转移影响的分子机制研究
发布时间：2017-04-26 09:01
本文关键词：LKB1对大肠癌血管生成及转移影响的分子机制研究，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的:研究LKB1对大肠癌血管生成及转移影响的分子机制,探讨二甲双胍对LKB1-AMPK-AKT信号通路的影响,为大肠癌的基因治疗提供新的分子靶点,对突变或缺失的LKB1进行修补有望成为治疗大肠癌血管生成及转移的新方法。方法:采用免疫组织化学SP法检测大肠癌组织芯片中抑癌基因LKB1的表达趋势。通过体外培养大肠癌LoVo细胞,将人工合成的LKB1siRNA由LipofectamineTM2000介导转染细胞。同时采用CCK8试剂盒检测在不同时间段不同浓度二甲双胍对大肠癌LoVo细胞的增殖影响,然后用适宜浓度的二甲双胍干预转染的大肠癌LoVo细胞。倒置显微镜观察细胞形态学变化,通过Western-Blot检测LKB1和P-LKB1、AMPK和P-AMPK、AKT和P-AKT蛋白的表达量。Boyden小室法测定二甲双胍对转染的大肠癌LoVo细胞迁移力和侵袭力的影响。结果:转染LKB1siRNA约48h后,Western-Blot检测LKB1和P-LKB1表达量明显减少,P-AMPK表达量也明显降低,而P-AKT表达量却增加,AMPK和AKT表达量均无明显变化。当二甲双胍浓度为20Mmol/L,干预细胞48小时,抑制率约50%,用20Mmol/L浓度二甲双胍干预转染的细胞后,LKB1、P-LKB1、AMPK、AKT蛋白表达量几乎没有增加,而P-AMPK表达量却增加,进而抑制了AKT的活化,使P-AKT表达量减少。结论:转染LKB1siRNA能敲除大肠癌LoVo细胞抑癌基因LKB1,LKB1表达降低。LKB1的缺失导致其下游通路中磷酸化AMPK减少,使磷酸化AKT的活化增加,促进肿瘤细胞增殖和血管生成,增强了大肠癌细胞迁移和侵袭力。二甲双胍在LKB1-AMPK-AKT信号通路中,可直接通过激活AMPK阻碍肿瘤细胞内蛋白合成,抑制肿瘤细胞的恶性增殖。
【关键词】：组织芯片 LKB1小干扰RNA LoVo细胞 迁移 侵袭
【学位授予单位】：湖北科技学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：
- 缩略词4-5
- 中文摘要5-6
- ABSTRACT6-8
- 前言8-10
- 第一部分 免疫组织化学法检测大肠癌组织中LKB1表达10-16
- 材料10-11
- 方法11-12
- 结果12-15
- 讨论15
- 结论15-16
- 第二部分 LKB1对大肠癌LoVo细胞生物学行为的影响16-42
- 实验一 SiRNA沉默LKB1基因表达16-22
- 材料16-18
- 方法18-22
- 实验二 二甲双胍对LKB1-AMPK-AKT信号通路的影响22-28
- 材料22-25
- 方法25-28
- 实验三 二甲双胍对大肠癌Lo Vo细胞迁移和侵袭的影响28-31
- 材料28-29
- 方法29-31
- 结果31-40
- 讨论40-41
- 结论41-42
- 参考文献42-44
- 综述44-50
- 参考文献48-50
- 攻读学位期间取得的学术成果50-51
- 致谢51
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本文编号：328104
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