长效GLP-1-IgG2σ Fc融合蛋白的真核表达与生物活性鉴定

发布时间：2017-04-28 07:14

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【摘要】：目的:在真核细胞中融合表达胰高血糖素样肽1(GLP-1),纯化后探究产物的生物学活性。方法:通过预留酶切位点将合成的GLP-1-Ig G2σFc融合蛋白表达序列连入表达载体质粒,用电转方法将线性化质粒稳定转染CHO-K1细胞,通过亚克隆筛选出蛋白高表达细胞株;收集高表达细胞株培养上清并初步纯化,采用口服葡萄糖耐量试验(OGTT)探究GLP-1融合蛋白降低血糖的生物学活性。结果:经过一轮亚克隆,筛选得到的细胞株的GLP-1融合蛋白产量达1 g/L,OGTT实验结果表明GLP-1融合蛋白具有降血糖生物活性。结论:GLP-1变体和Ig G2σ的Fc段连接是一种可行的融合蛋白形式,融合蛋白具有GLP-1受体激动剂的降糖作用,并且细胞株的筛选方式和初步纯化方法也具有可行性,为后续的体内、外活性研究和纯化方法确定提供了基础。
【作者单位】： 安徽医科大学;军事医学科学院放射与辐射医学研究所;
【关键词】： 胰高血糖素样肽 受体激动剂 融合蛋白 真核表达 口服葡萄糖耐量试验
【基金】：国家自然科学基金(81272701)
【分类号】：R392;Q78
【正文快照】： 胰高血糖素样肽1(glucagon like peptide-1,GLP-1)是由胰高血糖素原基因编码的一种肠促胰岛素激素,由肠道L细胞在接受进食刺激后合成分泌[1]。基于其血糖依赖性的促进胰岛素分泌作用和抑制胰高血糖素释放作用,GLP-1成为一种极具潜力的糖尿病治疗药物。然而,制约GLP-1成药的主

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本文编号：332359