“Cocktail”探针药物法评价丹参酮ⅡA对大鼠肝微粒体细胞色素P450不同亚型体外代谢活性的影响

发布时间：2017-04-29 02:03

  本文关键词：“Cocktail”探针药物法评价丹参酮ⅡA对大鼠肝微粒体细胞色素P450不同亚型体外代谢活性的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 建立评价大鼠肝微粒体药物代谢酶细胞色素P450(Cytochrome P450, CYP450)不同亚型CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4活性的'Cocktail"探针药物溶液的高效液相色谱检测方法；优化肝微粒体孵育条件,建立肝微粒体体外孵育体系,研究丹参酮IⅡA对大鼠肝微粒体该6种主要CYP450亚型体外代谢活性的影响,为临床合理用药提供参考。 方法： 选择CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4的特异性代谢底物咖啡因、美托洛尔、奥美拉唑、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗和咪达唑仑制备成"Cocktail"探针溶液,建立同时测定该6种探针药物在肝微粒体中的高效液相色谱检测方法。通过优化微粒体蛋白浓度和孵育时间,建立肝微粒体体外孵育体系。研究丹参酮ⅡA对大鼠肝微粒体内6种主要CYP亚型活性的影响。实验分三组进行：丹参酮ⅡA组、空白对照组和无活性组(不加大鼠肝微粒体组),每组实验平行三个样本。应用高效液相色谱-紫外检测(HPLC-UV)法检测大鼠肝微粒体中丹参酮ⅡA对探针底物代谢剩余量的影响,得到酶活性百分数,以丹参酮ⅡA浓度的对数为横坐标,以酶活性百分数为纵坐标,使用GraphPad Prism5.0软件按照非线性回归,作图并计算IC50值。评价丹参酮ⅡA在大鼠肝微粒体孵育体系中对CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4体外代谢活性的影响。 结果： 1.本研究所建立的高效液相色谱方法,可以同时测定6种探针药物咖啡因、美托洛尔、氯唑沙宗、奥美拉唑、甲苯磺丁脲和咪达唑仑在肝微粒体中的浓度,各吸收峰分离完全,线性关系良好,准确度、精密度及稳定性均符合生物样本检测要求,操作简便。 2.低浓度(0.5、1、2、4、8、16μmol·L-1)丹参酮ⅡA对大鼠肝微粒CYP1A2、 CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4酶活性无显著性影响(P0.05),而高浓度(32和96μmol·L-1)丹参酮ⅡA对大鼠肝微粒CYP1A2、 CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9和CYP2E1酶活性具有抑制作用(P0.05)。丹参酮ⅡA对大鼠肝微粒CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1的IC50值分别为32.48、34.76、26.12、26.29和26.38μmol·L-1,表示对其具有弱抑制作用。 结论： 1.本研究建立的大鼠肝微粒体中的'Cocktail"探针药物法操作简便,精密度、准确度、灵敏度高,检测周期短,能够同时评价药物在体外对大鼠肝微粒体6种主要CYP450亚型CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4活性的影响。 2.丹参酮ⅡA在体外大鼠肝微粒孵育体系中对CYP1A2、CYP2D6、 CYP2C19、CYP2C9和CYP2E1的代谢活性具有较弱的抑制作用。临床上通常不易发生代谢性药物相互作用。
【关键词】：细胞色素P450 酶(CYP450) 大鼠肝微粒体“Cocktail”探针药物法 高效液相色谱 丹参酮ⅡA药物相互作用
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R96
【目录】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• ~.略语10-11
• 前言11-15
• 研究现状、成果11-14
• 研究目的、方法14-15
• 一、“Cocktail”探针药物的制备及HPLC方法的建立15-31
• 1 实验材料15-16
• 2 实验方法16-19
• 3 实验结果19-30
• 3.1 方法的专一性19-21
• 3.2 肝微粒体标准曲线21-25
• 3.3 肝微粒体样品的灵敏度25-26
• 3.4 精密度实验结果26-28
• 3.5 回收率实验结果28-30
• 3.6 稳定性实验结果30
• 4 小结30-31
• 二、“Cocktail”探针药物法评价丹参酮ⅡA对大鼠肝微粒体CYP450不同亚型体外代谢活性的影响31-41
• 1 实验材料31-32
• 2 实验方法32-35
• 3 实验结果35-40
• 3.1 不同浓度丹参酮ⅡA对大鼠肝微粒体CYPs酶活性的影响35-36
• 3.2 抑制曲线及IC_(50)结果36-40
• 4 小结40-41
• 讨论41-48
• 结论48-49
• 参考文献49-54
• 发表论文和参加科研情况说明54-55
• 综述55-75
• 综述参考文献71-75
• 致谢75

【参考文献】

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