中国南海新型A-超家族芋螺多肽的合成及功能研究

发布时间：2017-04-30 16:03

  本文关键词：中国南海新型A-超家族芋螺多肽的合成及功能研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:本课题开展中国南海新型A-超家族芋螺多肽的合成、结构测定及功能研究,该工作可为这些多肽新功能的发现、新型镇痛药物及神经生物学工具药研制奠定基础。方法:(1)使用ABI433A合成仪,用Fmoc-固相合成的方法,再通过裂解、空气氧化一步折叠、富集、纯化等合成新型A-超家族芋螺多肽及其突变体。(2)双电极电压钳测定A-超家族芋螺多肽对烟碱型乙酰胆碱受体的作用靶点。(3)两步氧化折叠法测定A-超家族芋螺多肽的二硫键配对方式。结果:(1)合成了14种A-超家族芋螺多肽的纯品,分别是:Bt1.8、Vi1.6、Bt1.10、Lt1.1、Lt1.2、Lt1.3、Lt1.4、Im1.2、Bt14.10、Bt14.11、Bt14.14、Bt14.15、Bt14.19、Em14.1。(2)对其中11种A-超家族芋螺多肽进行了烟碱型乙酰胆碱受体靶点的初筛,发现α-芋螺毒素Bt1.10和Lt1.3作用于烟碱型乙酰胆碱受体α3β2亚型,IC50分别为52.94 n M和44.78 n M,而Bt1.8、Lt1.1和Lt1.2作用于α3β2和α3β4亚型,IC50分别为9.36 n M、166.76 n M和164.74 n M。(3)设计合成了Bt1.8的4个突变体,分别为:Bt1.8[N5H]、Bt1.8[I9A]、Bt1.8[N11E]和Bt1.8[Q15A],发现Bt1.8及其4个突变体对α3β2亚型的活性顺序为:Bt1.8[N5H]异构体1Bt1.8Bt1.8[Q15A]Bt1.8[N5H]异构体2Bt1.8[I9A]Bt1.8[N11E]。(4)设计合成了Vi1.6的4个突变体,分别为:Vi1.6[R1A]、Vi1.6[D2A]、Vi1.6[H11A]和Vi1.6[+16L],发现Vi1.6及其4个突变体对α3β2亚型的活性顺序为:Vi1.6[+16L]Vi1.6[R1A]Vi1.6Vi1.6[D2A]Vi1.6[H11A]。(5)对Bt1.8和Vi1.6进行了二硫键的测定,两者二硫键均为“C1-C3,C2-C4”。结论:(1)α-芋螺多肽Bt1.8对n ACh Rα3β2亚型抑制作用很强,其中9位的异亮氨酸、11位的天冬酰胺和15位的谷氨酰胺在其与α3β2的结合中起关键作用。(2)Vi1.6对α3β2亚型有选择性抑制作用,其第1位的精氨酸和第11位的组氨酸是功能氨基酸,在其第16位引入疏水残基能显著增强其对α3β2亚型的抑制作用。(3)α-芋螺多肽Lt1.1和Lt1.2选择性作用于神经元n ACh Rs的α3β2和α3β4亚型,而Bt1.10和Lt1.3则只作用于神经元n ACh R的α3β2亚型。(4)含四个单半胱氨酸结构的新型A-超家族芋螺多肽:Bt14.11、Bt14.14、Bt14.15和Bt14.19对神经元n ACh Rs的各亚型活性较弱。
【关键词】：A-超家族芋螺多肽 多肽合成 靶点鉴定 神经元烟碱型乙酰胆碱受体
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R914
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 符号说明11-12
• 第1章 绪论12-20
• 1.1 前言12-13
• 1.2 作用于nAChRs的芋螺毒素13-18
• 1.3 A-超家族芋螺毒素18-19
• 1.4 本实验研究的目的、内容和意义19-20
• 第2章 新型A-超家族芋螺多肽的合成20-36
• 2.1 引言20-21
• 2.2 实验材料21
• 2.3 实验方法21-22
• 2.4 实验结果22-34
• 2.5 讨论34-36
• 第3章 新型A-超家族芋螺多肽对nAchRs的抑制作用研究36-54
• 3.1 引言36
• 3.2 实验材料36-37
• 3.3 实验方法37-41
• 3.4 实验结果41-52
• 3.5 讨论52-54
• 第4章 两个新型A-超家族芋螺多肽的二硫键配对方式及CD谱测定54-60
• 4.1 引言54
• 4.2 实验材料54-55
• 4.3 实验方法55-56
• 4.4 实验结果56-59
• 4.5 讨论59-60
• 第5章 结论60-62
• 参考文献62-70
• 文献综述70-80
• 参考文献76-80
• 作者攻读学位期间的科研成果80-82
• 致谢82

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