高氨损伤肝细胞中CPS-Ⅱ特异性表达变化的研究

发布时间：2017-04-30 18:11

  本文关键词：高氨损伤肝细胞中CPS-Ⅱ特异性表达变化的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的为了研究肝衰竭病理过程中血氨的代谢特点,尤其是血氨通过氨基甲酰磷酸合酶Ⅱ(human carbamyi phosphate synthetase-Ⅱ, CPS-Ⅱ)途径的基本机制,探索血氨升高对肝细胞损伤的基本规律,为高血氨在肝衰竭发生中的分子生物学机制提供理论基础。方法体外构建细胞高血氨模型,设定不同梯度浓度的氯化铵(NH4C1)干预肝细胞混合孵育,光镜下观察肝细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Real-time PCR (RT-PCR)检测CPS-Ⅱ基因表达情况,Western blot检测CPS-Ⅱ蛋白定量。结果光镜下干预组与对照组相比,随着氨浓度的升高,肝细胞均出现不同程度的损伤、坏死和凋亡,对照组肝细胞形态良好。流式细胞仪分析发现肝细胞凋亡率逐渐增高,干预组细胞凋亡率(24.7%±2.39%)明显上升,显著高于对照组(4.1%±0.78%, q=8.06, P0.01). RT-PCR结果表明肝细胞中CPS-Ⅱ的mRNA的表达随着氨浓度梯度呈升高的趋势,对照组与干预组CPS-Ⅱ的mRNA的灰度值分别为1.040±0.045、1.641±0.123、2.285±0.167、3.347±0.124与正常对照组相比,干预组CPS-Ⅱ的mRNA的表达逐渐增强(F=191.881, P0.01)。 Western blot结果显示CPS-Ⅱ蛋白表达水平显著增强,CPS-Ⅱ蛋白与内参GAPDH灰度值比值：0.099±0.0130,0.143±0.025、0.161±0.036和0.223±0.042,干预组均明显高于对照组(t值分别为3.825、3.968和6.908,P0.01)。结论随着肝细胞外氨浓度升高,CPS-Ⅱ在肝细胞损伤中mRNA水平和蛋白表达均增强,表明在高氨情况下除鸟氨酸循环外,CPS-Ⅱ在参与氨代谢中可能发挥着重要作用。
【关键词】：CPS-Ⅱ 氨代谢 氨
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要4-6
• abstract6-9
• 中英文缩略词对照表9-10
• 研究背景10-17
• 前言17-21
• 1 材料和试剂21-24
• 2 实验方法24-28
• 结果28-31
• 讨论31-34
• 参考文献34-37
• 综述37-48
• 参考文献46-48
• 个人简历及在研期间发表论文48-49
• 致谢49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

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  本文关键词：高氨损伤肝细胞中CPS-Ⅱ特异性表达变化的研究，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：337364