PGDS-DP通路参与铝盐致原代培养大鼠海马神经元损伤机制初步探讨

发布时间：2017-05-03 22:01

  本文关键词：PGDS-DP通路参与铝盐致原代培养大鼠海马神经元损伤机制初步探讨，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：(1)观察铝负荷原代培养大鼠海马神经元PGDS-DP通路变化特征；(2)观察PGDS-DP通路干预对铝负荷原代培养大鼠海马神经元的影响。方法：(1)铝负荷原代培养大鼠海马神经元PGDS-DP通路变化情况选取孕期18d左右的SD大鼠,离体培养胎鼠海马神经元,d7进行NSE免疫组化鉴定并给予麦芽酚铝(Al(malt)3,终浓度100μM)建立铝负荷致原代培养大鼠海马神经元损伤模型(空白对照组给予PBS,对照组给予300μM麦芽酚)。MTT法测定海马神经元存活率；LDH法测定海马神经元乳酸脱氢酶漏出率；HE染色法观察海马神经元病理形态学变化；ELISA试剂盒检测海马神经元PGD2含量；RT-PCR检测海马神经元L-PGDS、DP1、DP2mRNA表达；Western-Blotting检测海马神经元L-PGDS、DP1、DP2蛋白表达。(2) PGDS-DP通路干预对铝负荷原代培养大鼠海马神经元的作用观察选取孕期18d左右的SD大鼠,离体培养胎鼠海马神经元,d7给予Al(malt)3建立铝负荷致原代培养大鼠海马神经元损伤模型,并给予DP1激动剂BW245C、DPI拮抗剂BWA868C. DP2激动剂DK-PGD2=DP2拮抗剂CAY10471进行干预。MTT法测定海马神经元存活率；LDH法测定海马神经元乳酸脱氢酶漏出率；HE染色法观察海马神经元病理形态学变化；Ca2+荧光探针Fluo-3/AM检测海马神经元胞内Ca2+水平。结果：(1)培养至7d的海马神经元聚集成团,有较强折光率；胞体呈椭圆形或锥体形,突起相互交织成稠密的网状结构。NSE鉴定神经元纯度超过95%。与空白对照组相比,铝负荷模型组神经元细胞数目明显减少,突起萎缩甚至消失,部分细胞核固缩；MTT值明显降低；LDH漏出率明显升高；PGD2含量明显升高；L-PGDS=DP1 mRNA和蛋白表达明显升高；DP2mRNA和蛋白表达明显降低。(2)与空白对照组相比,铝负荷模型组神经元Ca2+荧光强度明显增强。与铝负荷模型组相比,DP1激动剂BW245C干预组海马神经元细胞数目明显增多,部分突起仍相互交织成网状；MTT值明显升高；LDH漏出率明显降低；Ca2+荧光强度明显减弱。DP1拮抗剂BWA868C干预组海马神经元胞体破裂,无完整细胞结构；MTT值明显降低；LDH漏出率明显升高；尽管Ca2+荧光强度有增强趋势,但无显著性。DP2激动剂DK-PGD2干预组海马神经细胞几乎全部核固缩、裂解：MTT值明显降低；LDH漏出率明显升高；Ca2+荧光强度有增强趋势,但无显著性。DP2拮抗剂CAY10471干预组海马神经细胞胞体、胞核明显,裂解细胞明显减少；MTT值明显升高；LDH漏出率明显降低;Ca2+荧光强度明显降低。结论：(1)铝负荷原代培养大鼠海马神经元PGD2含量增加,L-PGDS.DP1表达升高,DP2表达降低。(2)DP1表达与激活可减弱神经元对铝盐损伤的易感性,DP2表达与激活可增强神经元对铝盐损伤的易感性。(3) PGDS-DP通路可能参与了铝负荷致原代培养大鼠海马神经元损伤机制。
【关键词】：原代培养海马神经元 麦芽酚铝 L-PGDs PGD_2 DP1 DP2
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R965
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-19
• 参考文献16-19
• 第一部分：铝负荷原代培养大鼠海马神经元PGDS-DP通路变化情况19-46
• 1 材料与方法19-31
• 2 实验结果31-38
• 3 讨论38-41
• 小结41-42
• 参考文献42-46
• 第二部分：PGDS-DP通路干预对铝负荷原代培养大鼠海马神经元的作用观察46-65
• 1 材料与方法46-49
• 2 实验结果49-58
• 3 讨论58-61
• 小结61-62
• 参考文献62-65
• 全文总结65-66
• 文献综述66-74
• 参考文献70-74
• 致谢74-75
• 攻读硕士研究生期间发表的论文75

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