共载阿霉素和MiR-34a的硬脂酰多肽胶束构建及其抗前列腺癌作用研究

发布时间：2017-05-03 22:09

  本文关键词：共载阿霉素和MiR-34a的硬脂酰多肽胶束构建及其抗前列腺癌作用研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：前列腺癌是目前欧美国家中发病率最高的生殖系统恶性肿瘤。近年来随着我国人民生活水平的提高,前列腺癌在我国的发病率也越来越高。前列腺癌初期是激素依赖型的,此时一般采用内分泌疗法。随着治疗的进行,激素依赖型的前列腺癌逐渐转变为激素非依赖型前列腺癌。对于激素非依赖型前列腺癌,目前还没有十分有效的治疗方法。化疗药物和基因药物联用是当前肿瘤治疗的热门方向,本课题选用广谱抗癌药阿霉素和基因药物miR-34a,通过硬脂酰多肽胶束介导,研究其抗激素非依赖型前列腺癌体内外作用。本课题的第一部分报道了共载阿霉素和miR-34a的硬脂酰多肽胶束构建及表征。通过固相合成法合成了含有聚精氨酸、组氨酸和硬脂酸的多肽单体,通过制备液相进行纯化以及高效液相和质谱检测纯度符合实验要求。利用半胱氨酸在低浓度的双氧水环境中引发多肽单体发生氧化反应,通过二硫键形成多肽聚合物。核磁氢谱以及GPC检测合成成功。接着通过多肽聚合物的自组装形成多肽胶束,利用其疏水性空腔和富含阳离子亲水端聚精氨酸分别包载化疗药物阿霉素和基因药物miR-34a。表征后发现胶束粒径约为160 nm,电位约为20 mV,载药量约为22.81%。本课题第二部分报道了共载阿霉素和miR-34a的硬脂酰多肽胶束抗激素非依赖型前列腺癌体外评价。激素非依赖型前列腺癌细胞DU145可以对胶束高效摄取,载药胶束进入细胞后,阿霉素释放进入胞核,基因药物miR-34a分布在胞质。体外细胞实验表明,硬脂酰多肽胶束可以有效介导miR-34a在DU145细胞内表达并抑制沉默信息调节因子1,最终阿霉素和miR-34a协同抗激素非依赖型前列腺癌细胞增殖并促进细胞凋亡。本课题第三部分报道了通过体内实验来验证共载阿霉素和miR-34a的硬脂酰多肽胶束抗激素非依赖型前列腺癌作用。实验成功构建了DU145前列腺癌裸鼠移植瘤模型,通过荧光标记多肽胶束发现其在体内可躲避网状内皮系统的吞噬,在肿瘤部位实现靶向聚集。肿瘤生长抑制实验和肿瘤组织的HE染色切片观察显示,阿霉素和miR-34a在硬脂酰多肽胶束介导下,可以协同抑制移植瘤的生长。安全性结果显示,该多肽胶束没有全身毒副作用,可以降低阿霉素对心脏的损害。通过本课题研究,以硬脂酰多肽胶束为载体,共载化疗药物和基因药物。为临床治疗激素非依赖型前列腺癌和其他肿瘤提供了参考和有益借鉴。
【关键词】：硬脂酰多肽胶束 阿霉素 miR-34a 共载 前列腺癌
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R943;R96
【目录】：

• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 缩略词表10-11
• 前言11-13
• 第一章 共载阿霉素和MiR-34a的硬脂酰多肽胶束构建及表征13-27
• 1 仪器和材料14-15
• 1.1 仪器14
• 1.2 试剂和材料14-15
• 2 实验方法15-19
• 2.1 硬脂酰修饰多肽的合成15-16
• 2.2 硬脂酰修饰多肽的表征16-17
• 2.3 共载阿霉素和miR-34a硬脂酰多肽胶束构建17
• 2.4 共载阿霉素和miR-34a硬脂酰多肽胶束表征17-19
• 3 结果19-25
• 3.1 HHHCRRRRRC 和 Stearyl-HHHCRRRRRC 的纯度鉴定结果3.1.1 HHHCRRRRRC 的 HPLC 和 MS 图谱19-21
• 3.2 多肽聚合物C-SHR的~1H-NMR 鉴定结果21-22
• 3.3 共载阿霉素和miR-34a硬脂酰多肽胶束粒径电位22-23
• 3.4 载药量和包封率23-24
• 3.5 琼脂糖凝胶电泳实验结果24-25
• 3.6 阿霉素体外释放25
• 4 讨论25-26
• 5 小结26-27
• 第二章 共载阿霉素和MiR-34a的硬脂酰多肽胶束抗前列腺癌作用体外评价27-41
• 1 仪器和材料27-28
• 1.1 仪器27-28
• 1.2 试剂和材料28
• 1.3 细胞株28
• 2 实验方法28-32
• 2.1 细胞培养28
• 2.2 细胞摄取考察28-29
• 2.3 细胞内分布考察29
• 2.4 抗激素非依赖型前列腺癌增殖作用考察29
• 2.5 促激素非依赖型前列腺癌凋亡作用考察29-30
• 2.6 激素非依赖型前列腺癌实时定量PCR实验30-31
• 2.7 蛋白抑制作用考察31-32
• 2.8 数据处理和统计方法32
• 3 结果32-39
• 3.1 激素非依赖型前列腺癌细胞摄取考察结果32-33
• 3.2 激素非依赖型前列腺癌细胞内分布考察结果33-34
• 3.3 抗激素非依赖型前列腺癌增殖作用结果34-36
• 3.4 促激素非依赖型前列腺癌凋亡作用结果36-37
• 3.5 多肽胶束介导miR-34a表达结果37-38
• 3.6 蛋白抑制作用结果38-39
• 4 讨论39-40
• 5 小结40-41
• 第三章 共载阿霉素和MiR-34a的硬脂酰多肽胶束抗前列腺癌作用体内评价41-55
• 1 仪器和材料41-42
• 1.1 仪器41
• 1.2 试剂和材料41-42
• 1.3 细胞株42
• 1.4 实验动物42
• 2 实验方法42-45
• 2.1 细胞培养42
• 2.2 人前列腺癌细胞裸鼠移植瘤模型的构建42
• 2.3 共载阿霉素和miR-34a硬脂酰多肽胶束体内分布考察42-43
• 2.4 共载阿霉素和miR-34a硬脂酰多肽胶束体内药效考察43-44
• 2.5 共载阿霉素和miR-34a硬脂酰多肽胶束安全性评价44
• 2.6 数据处理和统计方法44-45
• 3 结果45-52
• 3.1 动物造模实验结果45-46
• 3.2 体内分布考察结果46-48
• 3.3 肿瘤生长抑制及肿瘤重量考察结果48-49
• 3.4 肿瘤内SIRT1表达情况考察结果49-50
• 3.5 安全性考察结果50-52
• 3.6 裸鼠移植瘤组织切片观察结果52
• 4 讨论52-54
• 5 小结54-55
• 全文总结55-56
• 参考文献56-62
• 特色与创新之处62-63
• 综述63-71
• 参考文献68-71
• 科研工作简介71-73
• 致谢73

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 符友伟;吴蕾;;多肽固相合成法中的3个关键点[J];化学工业与工程;2010年04期

2 王良友,潘和平,陈正英;多肽合成中几种形成二硫键方法的介绍[J];有机化学;1998年06期

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本文编号：343848