脂肪干细胞通过EGFR/ERK通路减轻海水对表皮细胞增殖与迁移能力的抑制作用
发布时间：2021-10-20 22:37
目的通过体外研究探索人脂肪干细胞（hADSC）促进海水浸泡创面愈合的可能机制。方法利用人表皮细胞系HaCaT细胞和人工模拟海水建立海水浸泡创面导致细胞损伤的体外模型。从人脂肪组织分离、培养hADSC并进行鉴定,建立HaCaT细胞与hADSC共培养体系。利用活细胞计数试剂盒（CCK-8）、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷（EdU）细胞增殖检测试剂盒与细胞划痕实验等评估HaCaT细胞增殖、迁移能力,并通过蛋白质印迹与实时定量PCR技术检测表皮生长因子受体（EGFR）/细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路活化情况。结果在添加了10%海水的培养液中,HaCaT细胞的增殖活力已受到明显抑制,与不添加海水培养的细胞相比差异有统计学意义（P<0.05）。利用成功分离的hADSC与HaCaT细胞共培养模型,发现添加10%海水培养的HaCaT细胞增殖与迁移能力均低于不添加海水培养的HaCaT细胞及与hADSC共培养且添加10%海水培养的HaCaT细胞（P均<0.05）,而不添加海水培养的HaCaT细胞和与hADSC共培养且添加10%海水培养的HaCaT细胞增殖与迁移能力差异无统计学意义（P>...
【文章来源】：第二军医大学学报. 2019,40(10)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
hADSC共培养对海水浸泡HaCaT细胞增殖的影响
·1066·第二军医大学学报2019年10月，第40卷2.3hADSC共培养对海水浸泡的HaCaT细胞增殖影响通过EdU细胞增殖实验观察hADSC共培养对海水浸泡细胞增殖的影响，结果（图3）显示在10%海水组中，HaCaT细胞增殖受到抑制，细胞的增殖活力与未添加海水的对照组比较差异有统计学意义[（26.0±0.9）%vs（37.4±1.3）%，P＜0.01]；而hADSC共培养组HaCaT细胞增殖活力并未受到明显抑制，细胞的增殖活力高于海水组且差异有统计学意义[（36.3±2.3）%vs（26.0±0.9）%，P＜0.01]。2.4hADSC共培养对海水浸泡的HaCaT细胞迁移的影响细胞划痕实验结果显示，与不添加海水的对照组相比，10%海水组HaCaT细胞迁移能力在12h即显示出划痕闭合延缓，并持续至36h，修复面积与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01）；而在同一观测时间点，hADSC共培养组细胞的迁移能力相较于海水组显示出较高的愈合效率，修复面积与海水组相比差异有统计学图3hADSC共培养对海水浸泡HaCaT细胞增殖的影响Fig3Effectofco-culturewithhADSCsonproliferationofHaCaTcellsculturedwithseawaterhADSC:Humanadipose-derivedstemcell;EdU:5-ethynyl-2’-deoxyuridine.Originalmagnification:×1002.5hADSC共培养通过EGFR/ERK通路干预海水浸泡HaCaT细胞的增殖与迁移蛋白质印迹分析结果显示，10%海水组HaCaT细胞EGFR蛋白表达量低于对照组及hADSC共培养组，差异有统计学意义（P＜0.01）；而对照组与hADSC共培养组EGFR蛋白表达量差异无统计学意义（P＞0.05，图5A）。实时定量PCR结果显示，10%海水组HaCaT细胞ERKmRNA表达量低于对照组及hADSC共培养组，差异有统计学意义（P＜0.01）；而对照组与hADSC共培养组ERKmRNA表达量差异无统计学意义（P＞0.05，图5B）。意义（P＜0.01?
纬陕?源疵?[3]。海水浸泡后的创面组织细胞严重变性坏死，加重创面损伤[17]；创面局部炎症反应增强，局部炎症期延长，使创面修复延缓[18]；此外，大量研究表明，海水浸泡可导致创面中VEGF表达减少，创面新生血管内皮细胞和内皮祖细胞增殖受到抑制，创面新生血管化受到阻碍，造成创面愈合延缓[19-21]。但目前尚未见关于海水是否影响表皮细胞增殖与迁移的研究报道。本研究将人表皮细胞系HaCaT细胞作为创面上皮化的代表细胞，观察海水对其增殖与迁移的影响。真实环境下，创面最表面应该接触图5hADSC共培养通过EGFR/ERK通路干预海水浸泡HaCaT细胞的增殖与迁移Fig5Co-culturewithhADSCsinterferingproliferationandmigrationofHaCaTcellsculturedwithseawaterviaEGFR/ERKpathwayA:EGFRproteinexpressiondetectedbyWesternblotting;B:ERKmRNAexpressiondetectedbyreal-timequantitativePCR.hADSC:Humanadipose-derivedstemcell;EGFR:Epidermalgrowthfactorreceptor;ERK:Extracellular-regulatedproteinkinase.**P＜0.01vscontrolgroup;△△P＜0.01vsseawatergroup.n＝3,x±s第10期．熊佳超，等．脂肪干细胞通过EGFR/ERK通路减轻海水对表皮细胞增殖与迁移能力的抑制作用
本文编号：3447717
【文章来源】：第二军医大学学报. 2019,40(10)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
hADSC共培养对海水浸泡HaCaT细胞增殖的影响
·1066·第二军医大学学报2019年10月，第40卷2.3hADSC共培养对海水浸泡的HaCaT细胞增殖影响通过EdU细胞增殖实验观察hADSC共培养对海水浸泡细胞增殖的影响，结果（图3）显示在10%海水组中，HaCaT细胞增殖受到抑制，细胞的增殖活力与未添加海水的对照组比较差异有统计学意义[（26.0±0.9）%vs（37.4±1.3）%，P＜0.01]；而hADSC共培养组HaCaT细胞增殖活力并未受到明显抑制，细胞的增殖活力高于海水组且差异有统计学意义[（36.3±2.3）%vs（26.0±0.9）%，P＜0.01]。2.4hADSC共培养对海水浸泡的HaCaT细胞迁移的影响细胞划痕实验结果显示，与不添加海水的对照组相比，10%海水组HaCaT细胞迁移能力在12h即显示出划痕闭合延缓，并持续至36h，修复面积与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01）；而在同一观测时间点，hADSC共培养组细胞的迁移能力相较于海水组显示出较高的愈合效率，修复面积与海水组相比差异有统计学图3hADSC共培养对海水浸泡HaCaT细胞增殖的影响Fig3Effectofco-culturewithhADSCsonproliferationofHaCaTcellsculturedwithseawaterhADSC:Humanadipose-derivedstemcell;EdU:5-ethynyl-2’-deoxyuridine.Originalmagnification:×1002.5hADSC共培养通过EGFR/ERK通路干预海水浸泡HaCaT细胞的增殖与迁移蛋白质印迹分析结果显示，10%海水组HaCaT细胞EGFR蛋白表达量低于对照组及hADSC共培养组，差异有统计学意义（P＜0.01）；而对照组与hADSC共培养组EGFR蛋白表达量差异无统计学意义（P＞0.05，图5A）。实时定量PCR结果显示，10%海水组HaCaT细胞ERKmRNA表达量低于对照组及hADSC共培养组，差异有统计学意义（P＜0.01）；而对照组与hADSC共培养组ERKmRNA表达量差异无统计学意义（P＞0.05，图5B）。意义（P＜0.01?
纬陕?源疵?[3]。海水浸泡后的创面组织细胞严重变性坏死，加重创面损伤[17]；创面局部炎症反应增强，局部炎症期延长，使创面修复延缓[18]；此外，大量研究表明，海水浸泡可导致创面中VEGF表达减少，创面新生血管内皮细胞和内皮祖细胞增殖受到抑制，创面新生血管化受到阻碍，造成创面愈合延缓[19-21]。但目前尚未见关于海水是否影响表皮细胞增殖与迁移的研究报道。本研究将人表皮细胞系HaCaT细胞作为创面上皮化的代表细胞，观察海水对其增殖与迁移的影响。真实环境下，创面最表面应该接触图5hADSC共培养通过EGFR/ERK通路干预海水浸泡HaCaT细胞的增殖与迁移Fig5Co-culturewithhADSCsinterferingproliferationandmigrationofHaCaTcellsculturedwithseawaterviaEGFR/ERKpathwayA:EGFRproteinexpressiondetectedbyWesternblotting;B:ERKmRNAexpressiondetectedbyreal-timequantitativePCR.hADSC:Humanadipose-derivedstemcell;EGFR:Epidermalgrowthfactorreceptor;ERK:Extracellular-regulatedproteinkinase.**P＜0.01vscontrolgroup;△△P＜0.01vsseawatergroup.n＝3,x±s第10期．熊佳超，等．脂肪干细胞通过EGFR/ERK通路减轻海水对表皮细胞增殖与迁移能力的抑制作用
本文编号：3447717
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/yxlw/3447717.html
